?。哼@是在12月份ESAVS的試驗(yàn)室課程中分發(fā)的有關(guān)如何使用顯微鏡的使用先容,以前從來(lái)沒(méi)有想到過(guò)要寫這篇文章,我Zui早從初中就開(kāi)始在使用顯微鏡,Zui初是從單目標(biāo)Zui簡(jiǎn)略的那種反光鏡式顯微鏡開(kāi)始用起(還記得那時(shí)觀察的是植物根的不同層次),后來(lái)在高中生物課,大學(xué)的組胚和病理課程又有了很多的使用操作和培訓(xùn),至于后來(lái)到了德國(guó)LABOKLIN實(shí)驗(yàn)室,那一年多的時(shí)間幾乎天天就是和顯微鏡一起過(guò)的,所以從來(lái)沒(méi)有認(rèn)識(shí)到顯微鏡的使用有什么問(wèn)題,個(gè)人感覺(jué)這應(yīng)該屬于臨床醫(yī)生Zui為基礎(chǔ)的技巧之一,如果我跑來(lái)講顯微鏡怎么用,可能很多臨床醫(yī)生會(huì)感到受到了凌辱,就像現(xiàn)在有人跳出來(lái)說(shuō)要教你如何吃飯一樣讓人不可接收。上個(gè)月在杭州的ESAVS皮膚病學(xué)課上,Dr. Koch提到了這個(gè)問(wèn)題,他說(shuō)在德國(guó)很多獸醫(yī)師實(shí)在并不知道怎么恰當(dāng)?shù)氖褂蔑@微鏡,他信任在中國(guó)也有相似的情況,可能有一部分獸醫(yī)師也是沒(méi)有準(zhǔn)確恰當(dāng)?shù)氖褂蔑@微鏡,導(dǎo)致漏診,誤診,Zui嚴(yán)重的是導(dǎo)致很多獸醫(yī)師不再愿意使用顯微鏡,所以他建議寫這樣一篇文章以求能夠推廣正確恰當(dāng)?shù)姆绞剑ㄔ谡n程上的確看到很多很簡(jiǎn)單的誤操作的情形)。我不敢說(shuō)我寫的這篇使用先容正確或是恰當(dāng),只能算作是自己的一家之言和個(gè)人經(jīng)驗(yàn),??茨軌蛴斜囟ǖ膮⒖純r(jià)值,每個(gè)人使用的習(xí)慣可能都有不同,每個(gè)人都可能有自己的竅門和經(jīng)驗(yàn),希看能得到大家的探討和指正(先拋塊磚出來(lái)先……)。(文章中有三分之一的部分是從查到的材料中翻譯的,其他部分是自己依照平時(shí)的經(jīng)驗(yàn)所寫的,但是朋友看了后說(shuō)我自己的話也很有翻譯的感到,認(rèn)為我這是完整翻譯的,有些吐血,有些愁悶,因?yàn)楹艽笠徊糠执_切是我自己寫的,但是現(xiàn)在寫這種文章,稍不注意就是翻譯的語(yǔ)氣,可能是平時(shí)翻譯的文章做多了的緣故--英文語(yǔ)法原來(lái)就差,現(xiàn)在更是把中文的語(yǔ)法一起學(xué)差了,唉……)
如何適當(dāng)?shù)氖褂蔑@微鏡
陳宇馳
顯微鏡是我們獸醫(yī)日常診療Zui常用的診斷裝備之一。它在很多不同的獸醫(yī)范疇中有很多的用處,例如檢討螨蟲(chóng),皮膚刮片,拔毛檢查,微生物檢查,還在Zui常用和重要的細(xì)胞學(xué)和組織病理學(xué)上有很重要的作用。不過(guò)固然它在我們的日常診療工作中如此重要,但是我們?nèi)匀豢吹接泻芏嗟呐R床獸醫(yī)師過(guò)錯(cuò)或是不恰當(dāng)?shù)氖褂蔑@微鏡,由此而導(dǎo)致誤診,或是完全錯(cuò)失了診斷。因此納博科臨(LABOKLIN)動(dòng)物臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室上海分部試驗(yàn)室寫出了這個(gè)簡(jiǎn)略和基本的使用領(lǐng)導(dǎo),希望能夠明白和提供一些有關(guān)如何恰當(dāng)?shù)氖褂蔑@微鏡的指南。我們誠(chéng)摯??催@個(gè)指南能夠給臨床獸醫(yī)師提供一些輔助。如果需要更具體的信息,歡迎打電話或是發(fā)送郵件至納博科臨(LABOKLIN)動(dòng)物臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室上海分部實(shí)驗(yàn)室,我們樂(lè)于為您供給更多的協(xié)助和建議。
1.?dāng)喽ü饴返膶?duì)位正確
如果愿望獲得幻想的圖像質(zhì)量和正確的計(jì)數(shù)值,斷定對(duì)位的準(zhǔn)確是非常主要的條件條件。傳統(tǒng)相機(jī),數(shù)碼相機(jī)和電子圖像能夠供給比我們?nèi)庋壑苯硬炜锤靼椎?a href="http://www.hkxccw.cn/old_version/books/tech/jiegou.html" title="顯微鏡的構(gòu)造" class="sitelink">構(gòu)造細(xì)節(jié)。但是圖像的質(zhì)量和精確度仍然重要取決于適當(dāng)?shù)娘@微鏡對(duì)位和調(diào)節(jié)。但是如果你盼望檢討所有部件的對(duì)位,你須要一個(gè)有專業(yè)的技巧職員和一本操作手冊(cè)來(lái)完成這個(gè)步驟,這很難由你獨(dú)自在診所中完成。不過(guò)你可以相對(duì)簡(jiǎn)略的檢查對(duì)位的中心性,這樣可以比擬明白的肯定顯微鏡是否處于幻想的工作狀況。封閉光圈,檢討物鏡以斷定光圈的中心地位,如果不在中心則是有問(wèn)題的。同時(shí)開(kāi)放光圈,檢查在聚光器光圈四周反射的圖像,這些圖像應(yīng)當(dāng)是非常對(duì)稱的。(假如你需要有關(guān)對(duì)位檢查的更多信息,您可以接洽您的顯微鏡的生產(chǎn)廠商,或者也可以發(fā)送郵件到納博科臨(LABOKLIN)動(dòng)物臨床檢驗(yàn)試驗(yàn)室上海分部實(shí)驗(yàn)室。
2.適當(dāng)和舒適的坐姿,以求能夠長(zhǎng)時(shí)光的使用顯微鏡進(jìn)行工作
a)調(diào)劑座椅高度,以便你的腳能夠舒適的放在地面上,讓你的兩側(cè)大腿背側(cè)所受到的壓力均等。要坐在椅子中,而不要將腳放到椅子下面或是放在椅子底部,由于這樣會(huì)加重髖部的累贅,讓你很短的時(shí)光內(nèi)就會(huì)感到不舒暢。要注意經(jīng)常轉(zhuǎn)變腳放置的地位,以求能夠均衡的疏散背部和腿部肌肉的負(fù)荷。
注意:可在不斟酌顯微鏡高度的情形下調(diào)整座椅的舒適度。
b)調(diào)整顯微鏡的位置,以便你能夠在不顯明前傾的情況就能夠通過(guò)目鏡進(jìn)行觀察。這請(qǐng)求進(jìn)行2個(gè)調(diào)整步驟:首先,調(diào)整顯微鏡的程度位置,以使其目鏡靠近桌面的前緣。其次,調(diào)整顯微鏡的垂直高度以使其更高一些,以求能夠更加的舒適。這樣的調(diào)整可能需要在桌面上增添一個(gè)的平臺(tái)以墊高顯微鏡。
進(jìn)行以上的這些調(diào)劑,都是為了在你應(yīng)用顯微鏡時(shí)能夠伸直背部,這樣你的頭能夠堅(jiān)持在豎立體位,這樣更有利于更長(zhǎng)時(shí)光的工作。透過(guò)顯微鏡目鏡進(jìn)行察看時(shí)應(yīng)該是以眼光向下的姿態(tài)進(jìn)行視察,而不是彎頸探頭進(jìn)行觀察,否則很輕易造成頸背部肌肉的疲勞和損傷。由于桌子的高度固定,所以你應(yīng)該調(diào)節(jié)座椅的高度,以便能夠透過(guò)目鏡進(jìn)行觀察。因此有的時(shí)候可能你須要放置一張腳凳。放置顯微鏡的臺(tái)桌應(yīng)當(dāng)能夠至少能夠提供應(yīng)大腿必定的運(yùn)動(dòng)空間。
3.恰當(dāng)應(yīng)用顯微鏡的基礎(chǔ)步驟
n 將顯微鏡放置在有足夠空間便于你的工作的桌面或是其他平坦堅(jiān)實(shí)的平面上。我們見(jiàn)到過(guò)很多的獸醫(yī)診所/醫(yī)院將顯微鏡放在一個(gè)擁擠的角落,在顯微鏡周邊沒(méi)有足夠的空間放置玻片或是參考書(shū)籍,這種情況將在你使用顯微鏡工作時(shí)不斷給你一個(gè)不舒適的感覺(jué),這可能減少你破費(fèi)在樣本檢查上的時(shí)間,因而增高你做出誤診或是錯(cuò)失診斷的幾率。斟酌到顯微鏡在日常診療工作中的重要性和普遍用處,將顯微鏡放置在一個(gè)舒適的角落,并有足夠的空間可供使用是使得你或是你的員工能夠愛(ài)好使用顯微鏡進(jìn)行檢查的一個(gè)重要因素。
n 打開(kāi)顯微鏡光源,將載玻片放置到載物臺(tái)上,穩(wěn)固的固定好以保證在移動(dòng)玻片或是轉(zhuǎn)換鏡頭時(shí)玻片不會(huì)產(chǎn)生移動(dòng)。須要將聚光器放置到適合的地位以求能夠看到Zui好的細(xì)節(jié)信息(例如找到小的細(xì)菌)。為了能夠到達(dá)這個(gè)目標(biāo),聚光器應(yīng)該先放置在載物臺(tái)上的玻片之下。然后在高倍鏡下(例如40X鏡),先聚焦到玻片上的細(xì)胞之上。完整封閉在顯微鏡底部的光圈,然后聚光器小范疇的高低移動(dòng),直到視野中的光圈具有鋒利的邊沿。然后就應(yīng)該將聚光器堅(jiān)持在這個(gè)比擬幻想的位置。然后將這個(gè)光環(huán)調(diào)整到視野的中心位置,隨后打開(kāi)光圈直至視野中沒(méi)有暗影存在。隨后逐漸閉合聚光器上的光圈,直到感到視場(chǎng)中的光強(qiáng)度開(kāi)端有輕度的下降(5%-10%的水平);經(jīng)過(guò)這樣的調(diào)劑,就應(yīng)當(dāng)能夠更好的看到細(xì)胞內(nèi)的構(gòu)造。
n 旋轉(zhuǎn)粗準(zhǔn)焦螺旋直到樣本層位于焦點(diǎn)位置。旋轉(zhuǎn)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋直到樣本明白聚焦。然后調(diào)節(jié)光圈至Zui適合的光照強(qiáng)度。從Zui大的光照強(qiáng)度開(kāi)端,然后逐漸減少進(jìn)光量直到樣本具有一個(gè)清晰鋒利的對(duì)照度。這種操作對(duì)于尿液沉淀樣本或是皮膚刮片樣本尤其主要,通過(guò)減小光圈增高比較度對(duì)于使這些未染色的物資顯影是非常重要的,否則會(huì)由于視野太亮而無(wú)法看到細(xì)胞。除此之外,假如只是愿望獲得形態(tài)方面的信息,臨床醫(yī)生可能只是盼望能夠很輕易的找到諸如寄生蟲(chóng)卵,尿液管型或是在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器中的血小板的話,那么只需要把聚光器移到Zui低的位置就能夠到達(dá)這個(gè)目標(biāo),聚光器處在這個(gè)Zui低的位置上能夠供給Zui好的對(duì)照度。
n 旋轉(zhuǎn)物鏡旋轉(zhuǎn)盤到Zui低倍物鏡(通常是4倍物鏡)。在低倍鏡下掃看整張玻片(從右到左,從上到下)以獲得對(duì)樣本的整體印象,因?yàn)樵诘捅剁R下視野更大,因此在低倍鏡下觀察整張玻片就更為輕易。在你判讀一張細(xì)胞學(xué)涂片的時(shí)候,這個(gè)掃視整張玻片的步驟就更為主要,這樣能夠讓你能夠更容易更快速的找到需要使用高倍鏡進(jìn)行判讀的區(qū)域,更重要的是這個(gè)步驟能夠下降你漏看能夠做出準(zhǔn)確診斷涂片部分的幾率。因此做任何顯微鏡涂片的判讀都要從低倍鏡開(kāi)端,然后將你愿望在高倍下觀察的區(qū)域放置到中心位置。
n 假如你發(fā)明了適于進(jìn)行判讀的適合區(qū)域,或是需要察看更多的細(xì)節(jié)信息,旋轉(zhuǎn)物鏡旋轉(zhuǎn)盤至10倍物鏡。重新進(jìn)行聚焦并細(xì)心觀察樣本。然后再次對(duì)光照強(qiáng)度進(jìn)行調(diào)節(jié),以便獲得Zui為清楚的圖像(高倍鏡下你可能需要更多的光照)??梢栽?0X物鏡下使用同樣的步驟進(jìn)行操作,在這個(gè)物鏡放大倍數(shù)下你能夠看到你日常診療所需的大部分所必須的細(xì)節(jié)信息。但是請(qǐng)注意,應(yīng)用瑞氏染色一類的染色方式進(jìn)行染色的細(xì)胞在40X的物鏡下視察會(huì)發(fā)明細(xì)胞表示含混,無(wú)法看清細(xì)節(jié),由于這些細(xì)胞四周有空氣的存在,這會(huì)轉(zhuǎn)變其折光率導(dǎo)致這樣的高倍物鏡無(wú)法聚焦。使用封片膠蓋上蓋玻片或是滴上一滴油后蓋上蓋玻片能夠輔助往除在細(xì)胞四周的空氣,這樣在高倍的干性鏡頭下能夠看到更好的細(xì)節(jié)信息(或者也可只是蓋上一張蓋玻片,而不需再滴加任何介質(zhì)或是浸油,這也可贊助獲得更好的解析度)。
n 但是如果你試圖找出病原微生物(細(xì)菌,真菌孢子或是酵母菌)或是判定有無(wú)腫瘤細(xì)胞的惡性尺度,那么就可能需要使用更高倍的放大倍數(shù)。你應(yīng)該在你盼望觀察的部位滴上一滴顯微鏡浸油,然后旋轉(zhuǎn)100X的油鏡接觸到這滴顯微鏡浸油。一旦使用了顯微鏡浸油進(jìn)行視察,那么在將玻片上的浸油完整擦往以前都不能再使用40X的物鏡觀察玻片,否則會(huì)極大的破壞40X物鏡的鏡頭。如果在100X油鏡下細(xì)胞能夠聚焦,而在高倍的40X物鏡下無(wú)法聚焦,則闡明40倍的物鏡已經(jīng)被浸油所污染,這種情形下就需要使用棉簽浸濕擦鏡試劑對(duì)鏡頭進(jìn)行清算。
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