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      http://www.hkxccw.cn 來源:原創(chuàng) 日期:2011-7-16 7:59:28
       ?。ㄒ唬?a href="http://www.hkxccw.cn/product/dianzixianweijing/" title="電子顯微鏡" class="sitelink">電子顯微鏡的種類

        電子顯微鏡是以電子束作光源、電磁場(chǎng)作透鏡、具有高辨別率和放大倍率的顯微鏡。電鏡通過收集、收拾和分析電子與樣品相互作用發(fā)生的各種信息而獲得物體的形貌和構(gòu)造等。電鏡的類型也是應(yīng)用電子信號(hào)的不同和成像的不同而進(jìn)行分類。重要分為透射電子顯微電鏡、掃描電子顯微電鏡、剖析電子顯微鏡和高壓電子顯微鏡。

        1、 透射電子顯微電鏡

        透射電子顯微電鏡,是發(fā)展Zui早、利用Zui普遍的電鏡,一般所說的電鏡指的便是透射電鏡。透射電鏡重要用于視察組織細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)

        透射電鏡由三大系統(tǒng)組成,包含鏡系統(tǒng)統(tǒng)、真空系統(tǒng)和電子線路體系。鏡系統(tǒng)統(tǒng)是電鏡的主體,結(jié)構(gòu)相當(dāng)龐雜,又分為照明系統(tǒng)、成像系統(tǒng)和觀察記載系統(tǒng)。

        照明體系由電子槍和聚光鏡組成,電子槍發(fā)射電子作為電鏡的照明光源。在電鏡中電子射線在幾萬伏的加速電壓作用下產(chǎn)生了短波長高能電子束,加速電壓越高,電子束的波長越短,電鏡的分辯率就越高。聚光鏡則將來自電子槍的電子束會(huì)聚在樣品上并可調(diào)節(jié)照明強(qiáng)度等。

        成像系統(tǒng)由樣品室、物鏡、中間鏡和投影鏡組成,是電鏡具有高放大倍率和高分辯率的要害部位,主要是借助轉(zhuǎn)變各個(gè)透鏡的電流來獲得不同的放大倍率。成像系統(tǒng)的總放大倍率是物鏡、中間鏡和投影鏡放大倍數(shù)的乘積。

        觀察記載系統(tǒng)包括觀察室和底片室。觀察室內(nèi)有一個(gè)熒光屏,電子束穿透樣品,帶有樣品信息的電子經(jīng)成像系統(tǒng)放大投影到觀察室的熒光屏上,激發(fā)熒光屏發(fā)出可見光,透過的電子多熒光屏亮,反之則暗,熒光屏的亮、暗水平與樣品微細(xì)結(jié)構(gòu)逐一對(duì)應(yīng),終極產(chǎn)生具有必定反差的影象。圖像的保存可通過熒光屏下的底片室內(nèi)的膠片感光,使圖像拍攝下來,也可將圖片通過探頭輸送到盤算機(jī)中經(jīng)打印機(jī)打出圖片。

        電鏡有龐雜的真空體系和電路系統(tǒng)以保持鏡筒的高真空狀況和穩(wěn)固的工作條件。

        2、 掃描電子顯微鏡

        掃描電子顯微鏡,簡稱掃描電鏡。掃描電鏡應(yīng)用二次電子信號(hào)成像,用于觀察樣品表面形貌,圖像具有立體感。

        掃描電鏡的光源部分與透射電鏡雷同,是由電子槍發(fā)生電子射線經(jīng)聚光鏡聚焦形

        成一束極細(xì)的光斑稱為電子探針。電子探針受掃描產(chǎn)生器把持,在樣品表面進(jìn)行逐點(diǎn)掃描,把樣品表面的原子外層的電子擊出,形成二次電子,二次電子被二次電子檢測(cè)器收集、轉(zhuǎn)換、放大、轉(zhuǎn)換到顯象管,由于顯象管的熒光屏上的畫面與樣品被電子束照耀面呈嚴(yán)厲同步掃描,逐點(diǎn)逐行逐一對(duì)應(yīng),這樣就能看出樣品表面形貌。

        二次電子發(fā)射越多的處所,在像上相應(yīng)的點(diǎn)就越亮,反之則暗。由于二次電子發(fā)生的多少與電子束進(jìn)射角度有關(guān),也就是與樣品表面的起伏有關(guān),所以熒光屏上得到的圖像反映了樣品表面的立體形貌。

        3、 分析電子顯微鏡

        剖析電子顯微鏡,簡稱分析電鏡,是一種帶有特別附件波譜儀或能譜儀的電子顯微鏡。它可以裝配在透射電鏡上,也可以裝配在掃描電鏡上。當(dāng)高速活動(dòng)的電子會(huì)聚成電子束(探針)打到樣品上時(shí),所激發(fā)出來的X射線波長是和樣品內(nèi)所含元素的原子序數(shù)親密相干的。把特點(diǎn)性X射線依據(jù)其波長和強(qiáng)度分辨加以收集便可推知樣品內(nèi)包括哪些成分及各元素的含量。

        應(yīng)用剖析電鏡可以在察看樣品形貌的同時(shí)懂得渺小區(qū)域(如某一細(xì)微構(gòu)造)內(nèi)所含元素的種類及其含量,在細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)程度上對(duì)其內(nèi)部的化學(xué)元素成分進(jìn)行定位、定性、定量分析。從而獲知結(jié)構(gòu)變更與其組成的元素變更的關(guān)系,它的分辯率很高,元素周期表上大部分元素都能辨別出來。

        4、 高壓電子顯微鏡

        高壓電子顯微鏡,指加速電壓在120KV以上的透射電子顯微鏡,若加束電壓在500KV以上稱為超高壓電鏡。目前世界上超高壓電鏡Zui高的加速電壓可達(dá)3000 KV。

        高壓電子顯微鏡的重要特色是辨別本事高,對(duì)樣品的穿透才能強(qiáng),可用于察看較厚的樣品,整體培育的細(xì)胞不需超薄切片即可視察內(nèi)部的三維微細(xì)構(gòu)造,如微絲、微管等,在偏振鏡下可浮現(xiàn)三維排列的圖象特色。但電鏡體積宏大,價(jià)錢昂貴,難以普及。

       ?。ǘ╇婄R樣品制備技術(shù)

        電鏡樣品制備技術(shù)較龐雜,種類也較多,分為普通樣品制備技術(shù)和特別樣品制備技術(shù)。這里簡略先容幾種常用的樣品制備技術(shù)。

        1、超薄切片技術(shù)

        超薄切片技巧是透射電鏡樣品制備方式中Zui基礎(chǔ)的一種。由于電子束穿透才能的限制透射電鏡察看的樣品必需很薄,普通光鏡切片厚度約3~5μm,而透射電鏡切片厚度則請(qǐng)求在50~80nm左右。這種薄切片稱為超薄切片。超薄切片技術(shù)包含:取材、固定、脫水、浸透、包埋、切片及染色。

        電鏡樣品采取戊二醛和鋨酸雙重固定,用酒精或丙酮脫水,環(huán)氧樹脂進(jìn)行包埋,

        超薄切片機(jī)切片,采取重金屬如鈾和鉛進(jìn)行染色以增添細(xì)胞結(jié)構(gòu)間的反差。

        2、負(fù)染色技術(shù)

        負(fù)染色技術(shù)又稱陰性染色,是透射電鏡樣品制備技術(shù)中的一種。此技術(shù)是指通過重金屬鹽在樣品四周堆積而增強(qiáng)樣品外周的電子密度,使樣品顯示負(fù)反差,烘托出樣品的形態(tài)和大小。常用的重金屬有磷鎢酸鈉、醋酸鈾等。

        負(fù)染色技術(shù)主要用于細(xì)菌、病毒、噬菌體等微生物大分子結(jié)構(gòu)、亞細(xì)胞碎片以及分別的細(xì)胞器等研討工作。負(fù)染色樣品不需經(jīng)過固定、脫水包埋和超薄切片等復(fù)雜操作,而是直接對(duì)沉降的樣品勻漿懸浮液進(jìn)行染色。

        3、冷凍蝕刻技巧

        冷凍蝕刻技術(shù)又稱冷凍復(fù)型,是透射電鏡樣品制備技術(shù)的一種,是將樣品經(jīng)快速冷凍→斷裂→升華→噴鉑→噴碳而終極形成一層印有生物樣品斷裂面立體結(jié)構(gòu)的復(fù)型膜,然后將生物樣品腐化掉,用銅網(wǎng)將復(fù)型膜撈起進(jìn)行透射電鏡觀察。

        冷凍蝕刻技巧能堅(jiān)持細(xì)胞本來的結(jié)構(gòu),立體感鮮明,主要用于生物膜的研討。

        4、掃描電鏡樣品制備技術(shù)

        掃描電鏡合適于研討生物樣品的表面特點(diǎn),樣品制備包含視察面的裸露、固定、脫水、干燥和導(dǎo)電等。

        樣品制備采用戊二醛和鋨酸雙重固定;乙醇或丙酮脫水。干燥是掃描電鏡樣品較

        主要的步驟。由于生物樣品柔軟多水,大多數(shù)的組織含水量在80%以上,采用自然干燥,會(huì)受表面張力影響使細(xì)胞表面壓縮,形態(tài)轉(zhuǎn)變。所以多采取液體CO2臨界點(diǎn)干燥法,在臨界狀況時(shí)表面張力系數(shù)為零,也就是分子的內(nèi)聚力即是零時(shí)干燥,細(xì)胞不再壓縮,堅(jiān)持了原有的形態(tài)。由于干燥樣品不導(dǎo)電,因而須要在樣品表面鍍一層薄薄的金屬膜使樣品導(dǎo)電并增添圖像的反差和立體感。


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