顯微鏡,顯微鏡價格,顯微鏡的價格

　　 復(fù)方苦參注射液聯(lián)合奧沙利鉑對人肝癌

　　細(xì)胞株SMMC一7721增殖與凋亡的影響

　　210002 南京解放軍八一醫(yī)院全軍腫瘤中心

　　華海清，姜子瑜，楊愛珍，秦叔逵

　　【摘要】 目標(biāo)通過觀察復(fù)方苦參注射液、奧沙利鉑(OXA)及其兩藥聯(lián)合對人肝癌細(xì)胞株SMMC一7721增殖與凋亡

　　的影響，探討中藥與化療藥物聯(lián)合利用的協(xié)同增效作用。方式 采取MTY法視察復(fù)方苦參注射液、OXA及其兩藥聯(lián)合對

　　SMMC一7721細(xì)胞增殖的影響；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析對細(xì)胞周期的影響；采用原位末端標(biāo)志法(TUNEL)和熒光染色法觀察對細(xì)

　　胞凋亡的作用。結(jié)果復(fù)方苦參注射液和OXA對SMMC-7721細(xì)胞均有顯著的抑制增殖作用，該作用隨著藥物作用時間的延

　　長、劑量的增長而逐漸加強(qiáng)(P<0．01)；兩藥聯(lián)合表現(xiàn)為相加或協(xié)同作用，與單藥比較，有顯著性差別(P<0．05)。TUNEL法

　　檢測結(jié)果表明，復(fù)方苦參注射液(25 L／m1)、OXA(1 g／m1)以及兩藥聯(lián)合作用于SMMC-7721細(xì)胞后均可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡，

　　凋亡指數(shù)(AI)分別為25．2％、16．2％和36．3％ ，聯(lián)合組明顯優(yōu)于單藥組(P<0．05)。流式細(xì)胞術(shù)剖析顯示，復(fù)方苦參注射液、

　　OXA均可使細(xì)胞被阻滯于Go／G．期，兩藥聯(lián)合較單藥更為明顯(P<0．05)。結(jié)論復(fù)方苦參注射液、OXA均能抑制人肝癌細(xì)

　　胞株SMMC-7721的增殖和引誘細(xì)胞凋亡，將細(xì)胞阻滯于G。／G．期，兩藥聯(lián)合后作用增強(qiáng)，提醒復(fù)方苦參注射液和OXA聯(lián)合應(yīng)

　　用治療肝癌可能會起到協(xié)同增效的作用。

　　【要害詞】 復(fù)方苦參注射液； 奧沙利鉑； 肝癌細(xì)胞； 細(xì)胞增殖； 細(xì)胞凋亡

　　中圖分類號：R730．51；R735．7 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1009—0460(2010)01—0010—06

　　The efect of Fufangkushen injection alone and the combined efect with oxaliplatin for antiproliferative and

　　apoptotic action on human hepatoma cell line SMM C-7721

　　HUA Hai—qing，JIANG Zi—yu，YANG Ai-zhen，QIN Shu—kui．Center ofOncology，N鋤 g 81 Hospital ofPLA，

　　ⅣⅡ ng 210002，China

　　【Abstract】 Objective By observing the efects of Fufangkushen injection and oxaliplatin alone and their combined effects for

　　cell proliferation and apoptosis on human hepatoma cell lines SMMC-7721 in vitro，the efect combination of chemotherapy with tradi—

　　tional medicine to cure hepatocarcinoma is investigated． M ethods MTr—test was used to estimate the inhibition of proliferation on

　　SMMC．772 1；flow cytometry Was applied to ana1) ze the distribution of cell cycle；fluorescence microscope and TUNEL method were

　　employed to observe the cell apoptosis．Results Fufangkushen injection and oxaliplatin could markedly inhibit the cell proliferation，

　　and the efect depended on exposure time and dose(P<0．01)；when they worked combinedly，the efect was additive and synergistic，

　　which had statistical significance comparing with Fufangkushen injection and oxaliplatin alone．TUNEL method showed that Fu—

　　fangkushen injection(25 m1)，oxaliplatin(1Ixg／m1)，as well as the two combined，could induce the apoptosis ofSMMC-7721；the

　　apoptosis index(AI)were 25．2％ ，16．2％ and 36．3％ respectively(P<0．05)，which were obvious that the combined group signifi—

　　cantly excelled the single work．Flow eytometry showed the proportion of ceHs increased at G0／Gl phase while it decreased at S phase，

　　indicating that drugs blocked cells at G0／G1 phase．The efect of pair work Was clearly superior to the single drug(P<0．05)．Con。

　　clusion Fufangkushen injection and oxaliplatin can inhibit the proliferation，induce the apoptosis of SMMC-7721 cell lines，and block

　　the cell cycle at G0／G1 phase．It is suggested that when those two drugs comb ined，a synergistic effect may be gotten for the treatment

　　of liver cancer on the liver cells．

　　【Key Words】Fufangkushen injection； Oxaliplatin； Human hepatoma cell； Proliferation of cells； Apoptosis of cells

　　基金項目：全軍“十一?五”中醫(yī)藥臨床重大攻關(guān)項目(2006051005)

　　志2010年1月第15卷第1期 lh； !se cl ! () ! 缸： Q ：!：

　　復(fù)方苦參注射液是由苦參、土茯苓為主的多味

　　中草藥經(jīng)現(xiàn)代技巧加工制成的現(xiàn)代中藥制劑，具有

　　必定的抗腫瘤作用1-2。作為常用的化療藥物，奧

　　沙利鉑(OXA)對消化體系腫瘤有較好的療效。為

　　了探討復(fù)方苦參注射液與OXA聯(lián)合利用對原發(fā)性

　　肝癌是否具有協(xié)同增效作用，我們以人肝癌細(xì)胞株

　　SMMC 7721為研究對象，察看了兩藥單用及聯(lián)合對

　　該細(xì)胞株增殖與凋亡的影響，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

　　1 資料與方式

　　1．1 資料

　　1．1．1 細(xì)胞株人肝癌細(xì)胞株SMMC一7721購自中

　　國科學(xué)院上海細(xì)胞生物研究所。

　　1．1．2 重要藥品與試劑復(fù)方苦參注射液(簡稱：

　　復(fù)方苦參)：山西振東金晶藥業(yè)有限公司；注射用

　　OXA：南京制藥廠；噻唑藍(lán)(Mrr)：Sigma公司；

　　Roche原位細(xì)胞凋亡檢測(TUNEL)試劑盒：北京中

　　杉生物技巧有限公司；優(yōu)級新生小牛血清：杭州四季

　　青生物工程公司；EDTA液：0．02％ ；鹽酸異丙醇：

　　0．04mol／L，麥克奧迪；RPMI—l640培育基：Gibco公司；吖啶橙

　　(AO)／溴乙啶(EB)染液．：用PBS(pH7．2)配制AO／

　　EB各為lOO~g／ml的混雜溶液，4~C避光保留。

　　1．2 實驗辦法

　　1．2．1 MTF法觀察復(fù)方苦參和OXA對SMMC一

　　7721細(xì)胞增殖的影響 取對數(shù)生長期SMMC一7721

　　細(xì)胞，消化制成單細(xì)胞懸液后，以3 X 10 ／ml濃度接

　　種于96孔板內(nèi)，100~L／：fL，其中1個孔留作空白，在

　　37~C、5％CO 飽和濕度條件下的培養(yǎng)箱中造就24h。

　　取96孔板，參加配制好的不同濃度梯度的復(fù)方苦參

　　和OXA，使得復(fù)方苦參每孑L終濃度分別為6．25、

　　l2．5、25、50、100txL／ml，OXA每孑L終濃度分別為

　　0．125、0．25、0．5、1、2 g／ml，陰性對照組每孔參加

　　100pJ普通造就液，空缺孔加200tzl普通培育液(不

　　加細(xì)胞)，每個濃度組設(shè)3個復(fù)孔。置37~c、5％co，

　　飽和濕度條件下的造就箱中培養(yǎng)24、48、72h后棄上

　　清，每孑L加進(jìn)1mg／ml M1Tr 1001xl，持續(xù)溫育4h后吸

　　棄上清，參加鹽酸異丙醇1001xl，振蕩10rain后，用

　　主動酶標(biāo)讀數(shù)儀，在波長570nm處測定各孑L光接收

　　值(A)，取3個復(fù)孑L的平均值。以時間為橫軸，A值

　　為縱軸繪制細(xì)胞生長曲線，并計算藥物作用24、48、

　　72h后的增殖抑制率。

　　抑制率=[1一(實驗組均勻A值一空缺孑L平均

　　A值)／(陰性對比組均勻A值一空缺孑L均勻A

　　值)j×100％。

　　依據(jù)計算得出各組的Ic 。值，選擇適合的復(fù)方

　　苦參、OXA的濃度，將兩藥物聯(lián)合，反復(fù)M1Tr法，繪

　　制細(xì)胞增殖曲線，盤算24、48、72h后的細(xì)胞增殖抑

　　制率。根據(jù)Weeb系數(shù) 來判定聯(lián)合應(yīng)用后的藥物

　　作用，判定兩藥是否具有聯(lián)合增效作用，采用以下公

　　式計算：預(yù)估效應(yīng)C=A×B，其中A、B分辨指兩種

　　藥物作用后的細(xì)胞存活率。當(dāng)實際存活率<C時，

　　聯(lián)合處置即表現(xiàn)出協(xié)同作用；當(dāng)實際存活率=C時

　　聯(lián)合處置即表示出相加作用；當(dāng)C<實際存活率<A

　　和B時，聯(lián)合處理即表現(xiàn)出次加作用。

　　1．2．2 流式細(xì)胞術(shù)分析藥物對SMMC-772 l細(xì)胞周

　　期的影響 將制備好的細(xì)胞標(biāo)天職組后根據(jù)MTI"

　　實驗結(jié)果選擇的劑量加進(jìn)復(fù)方苦參、OXA單藥以及

　　兩藥聯(lián)合，于37℃ 、5％CO，飽和濕度條件下培育

　　48h。0．25％胰蛋白酶消化后，收集細(xì)胞離心1000r／

　　rain×10min，棄上清液，將離心出的細(xì)胞PBS洗滌2

　　次，1000 r／min X 10min離心后，吸盡上清液，用

　　200lxl結(jié)合緩沖液懸浮細(xì)胞，分~JOJH入10 l Annex—

　　in—V—FITC和5 l PI混勻，避光4oC反映30min，再加

　　進(jìn)3001~1聯(lián)合緩沖液，立即于流式細(xì)胞儀檢測。

　　1．2．3 原位末端標(biāo)志法(TUNEL)觀察各組SMMC一

　　7721細(xì)胞凋亡情形 將制備好的細(xì)胞標(biāo)本依據(jù)

　　MTF實驗結(jié)果選擇的劑量加藥，實驗組分辨加復(fù)方

　　苦參、OXA單藥以及兩藥聯(lián)合，陰性對照組加等量

　　PBS液，培養(yǎng)48h后撈片。兩藥聯(lián)合運(yùn)用甲苯透明

　　處理，按解釋書經(jīng)TUNEL法染色后，蘇木素輕度復(fù)

　　染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明樹膠封片，鏡檢。光

　　鏡下觀察，凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈黃褐色。10 X 10低

　　倍鏡下隨機(jī)選取5個細(xì)胞均勻散布的視野，10 X 20

　　中倍鏡下每個視野隨機(jī)選50個細(xì)胞計數(shù)凋亡細(xì)胞

　　數(shù)目和總的細(xì)胞數(shù)目，盤算凋亡指數(shù)(AI)。AI：凋

　　亡細(xì)胞數(shù)／總細(xì)胞數(shù)×100％。

　　1．2．4 熒光顯微鏡視察各組SMMC一7721細(xì)胞形態(tài)

　　變更將制備好的細(xì)胞標(biāo)本依據(jù)MTT實驗結(jié)果選

　　擇的劑量加藥，陰性對照組加等量普通培養(yǎng)液，于

　　37~C、5％CO 條件下持續(xù)培養(yǎng)48h。0．25％胰蛋白

　　酶消化后，收集上清細(xì)胞及貼壁細(xì)胞，細(xì)胞離心后將

　　離心出的細(xì)胞加2001xl培養(yǎng)液，81xl AO／EB染液，制

　　成細(xì)胞懸液，取一滴于載玻片上，蓋以蓋玻片，在熒

　　光顯微鏡下觀察300個細(xì)胞，分離計數(shù)活細(xì)胞

　　(VN)、早期凋亡細(xì)胞(VA)、晚期凋亡細(xì)胞(NVA)

　　和逝世細(xì)胞(NVM)數(shù)，依照下列公式盤算凋亡率。

　　? l2? 20l0年1月第15卷第1期Chinese Clinical

　　凋亡率=(VA+NVA)／(VA+NVA+NVM+

　　VN)x100％

　　1．3 統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS 15．0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計

　　剖析，兩樣本均數(shù)比較采取成組t檢驗，計數(shù)材料比

　　較采取 檢驗。以P<0．05為差別有統(tǒng)計學(xué)意義。

　　2 結(jié)果

　　2．1 復(fù)方苦參、OXA及其兩藥聯(lián)合對SMMC-7721

　　細(xì)胞增殖的影響

　　2．1．1 復(fù)方苦參、OXA對SMMC-7721細(xì)胞的抑制

　　作用MrlT法檢測結(jié)果表明，復(fù)方苦參和OXA對

　　SMMC-7721細(xì)胞均有顯著的抑制細(xì)胞增殖的作用

　　(P<0．01)，該作用具有時光、劑量依附性，即隨著

　　藥物作用時光的延伸、劑量的增添，對細(xì)胞的克制作

　　用逐漸加強(qiáng)。根據(jù)中效方程式計算復(fù)方苦參48、

　　72h對SMMC-7721細(xì)胞的Ic50值分離為38Ixl／ml、

　　2l l／／Illl；OXA 48、72h對SMMC-7721細(xì)胞的IC50值

　　分辨為0．65 g／ml、0．43Ixg／ml。見表1。

　　表1 復(fù)方苦參、OXA作用于SMMC-7721細(xì)胞的抑制率(％)

　　注：不同濃度各組之間比較，’P<O．O1；不同時間各組之間比較， P<0．01

　　2．1．2 復(fù)方苦參聯(lián)合OXA對SMMC-7721細(xì)胞的

　　抑制作用根據(jù)藥物對SMMC-7721細(xì)胞Ic∞值的

　　結(jié)果，選擇濃度為50IxL／ml的復(fù)方苦參與1 g／ml的

　　OXA聯(lián)合作用于SMMC-7721細(xì)胞，計算24、48、72h

　　的抑制率，結(jié)果表明：(1)復(fù)方苦參和OXA聯(lián)合組

　　與兩單藥組的作用比擬，克制率有顯明進(jìn)步(P<

　　0．05)；(2)復(fù)方苦參和OXA聯(lián)合作用24h和72h

　　后，細(xì)胞的存活率分離為52．80％和6．43％，高于預(yù)

　　計值48．87％ 和5．87％，表現(xiàn)為相加作用，但作用

　　48h后細(xì)胞存活率為18．14％ ，低于預(yù)計值

　　19．66％ ，表示為協(xié)同作用。見表2、圖1。

　　表2 復(fù)方苦參和OXA聯(lián)合作用于SMMC-7721細(xì)胞的抑制率(％)

　　注：與單用復(fù)方苦參或OXA比較， P<O．05

　　2．2 流式細(xì)胞術(shù)觀察藥物作用48h后SMMC-7721

　　細(xì)胞周期的變更 SMMC-7721細(xì)胞經(jīng)復(fù)方苦參

　　50~l／ml、OXA1Ixg／ml和兩藥聯(lián)合作用48h后，用流

　　式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期分析，結(jié)果顯示，復(fù)方苦參和

　　OXA均可使G。／G。期細(xì)胞比例升高，s期細(xì)胞比例

　　降落，細(xì)胞被阻滯于G。／G。期；當(dāng)兩藥聯(lián)合后作用較

　　復(fù)方苦參和OXA單藥更為明顯(P<0．05)。見表

　　3、圖2。

　　2010年1月第l5卷第1期Chinese ClinieM Oneology，Jan．2010，Vol ．

　　斟

　　器

　　量

　　逐一復(fù)方苦參+OXA

　　24 48

　　時光(h)

　　圖1 復(fù)方苦參和OXA作用于SMMC-7721細(xì)胞

　　的時效曲線

　　表3 藥物作用48h后細(xì)胞周期散布(％)

　　注：與對照組比擬， P<0．05； P<0．01；與復(fù)方苦參組比較， P

　　<0．Ol；與OXA組比擬，’P<0．05

　　2．3 TUNEL法觀察藥物作用48h后對SMMC．7721

　　細(xì)胞凋亡的影響 選擇復(fù)方苦參25 l／ml、OXA

　　1 g／ml單藥以及兩藥聯(lián)合作用于SMMC-7721細(xì)

　　胞，48h后用TUNEL法檢測細(xì)胞核的染色情形。光

　　鏡下視察凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈塌陷固縮，被染上深

　　褐色(圖3)。在陽性對照組，經(jīng)過脫氧核糖核酸酶

　　I(DNase I)處置后，染色體DNA雙鏈斷裂較充

　　分，視野中細(xì)胞核幾乎全體染成深褐色。而在陰性

　　對比組，幾乎沒有細(xì)胞核被染上深褐色，因此在蘇木

　　精復(fù)染時被染上了淡紫色。在藥物組中，由于非特

　　異性吸附，也有較多細(xì)胞被染上褐色，但是細(xì)心鑒

　　別，只有凋亡的細(xì)胞核不但染成深褐色，而且色彩濃

　　重，體積較小，符合凋亡時細(xì)胞核固縮的特點。計算

　　凋亡指數(shù)(AI)后顯示，復(fù)方苦參和OXA單藥均能

　　引起細(xì)胞凋亡，且當(dāng)兩藥聯(lián)合后凋亡率顯著增長。

　　見表4。

　　表4 藥物作用48h后細(xì)胞凋亡指數(shù)(％ )

　　復(fù)方苦參(25~ m1)

　　OXA(1 m1)

　　復(fù)方苦參(25 ／m1)+OXA(1 g／m1)

　　注：與復(fù)方苦參組比較，’P<0．05；與OXA組比較， P(0．01

　　? 13 ?

　　2．4 熒光顯微鏡觀察藥物作用后SMMC-7721細(xì)胞

　　形態(tài)的變更 選擇復(fù)方苦參50~l／ml、OXA1 g／ml

　　以及兩藥聯(lián)合作用于SMMC-7721細(xì)胞。經(jīng)AO／EB

　　染色后，活細(xì)胞(VN)核染色質(zhì)著綠色呈正常構(gòu)造，

　　早期凋亡細(xì)胞(VA)核染色質(zhì)著綠色呈固縮狀或碎

　　裂狀，晚期凋亡細(xì)胞(NVA)核染色質(zhì)著橘紅色呈固

　　縮狀或碎裂狀，逝世細(xì)胞(NVM)核染色質(zhì)著橘紅色呈

　　正常構(gòu)造(圖4)。成果顯示，復(fù)方苦參和OXA單藥

　　均可引起細(xì)胞凋亡，兩藥聯(lián)合后凋亡率明顯增添。

　　見表5。

　　表5 藥物作用48h后細(xì)胞凋亡率

　　注：與對照組比較， P<0，01；與復(fù)方苦參組、OXA組比較， P

　　<0．05

　　3 討論

　　藥物治療是失往局部治療指征的中晚期肝癌的

　　重要治療手腕，化療可以起到遷就性的治療作用，但

　　療效欠佳，一般以為有效力在15％ 以下，目前尚無

　　證據(jù)證實能夠延伸患者生存。中醫(yī)藥是中晚期肝癌

　　治療的常用辦法之一，大批的臨床和實驗表明，中藥

　　治療肝癌副作用小，有助于穩(wěn)固瘤體，提高患者的生

　　活質(zhì)量，并有可能延伸生存。如何將化療與中醫(yī)藥

　　治療有機(jī)聯(lián)合起來，以取長補(bǔ)短，上風(fēng)互補(bǔ)，從而提

　　高肝癌綜合治療后果，一直是臨床探討的主要課題。

　　OXA是第三代水溶性鉑類化合物，其化學(xué)名為

　　左旋反式二氨環(huán)己烷草酸鉑，其抗癌作用與順鉑

　　(PDD)和卡鉑(CBP)類似，以DNA為靶作用部位，

　　鉑原子與DNA鏈上G共價聯(lián)合，形成鏈內(nèi)交鏈、鏈

　　間交鏈及蛋白質(zhì)交鏈，使DNA損傷，損壞DNA復(fù)

　　制，造成腫瘤細(xì)胞逝世亡。試驗研討顯示，必定濃度的

　　OXA可以抑制原發(fā)性肝癌細(xì)胞株HepG2的體外增

　　殖，引誘其產(chǎn)生凋亡 J。臨床研討表明，以O(shè)XA為

　　主的FOLFOX計劃化療對于國人原發(fā)性肝癌療效

　　較好，安全性較高，不良反映較輕，耐受性好 』，一

　　項FOLFOX方案與阿霉素進(jìn)行隨機(jī)對照的Ⅲ期臨

　　， 。． 石5． 4． 3 L2 J O 。

　　苤勝擅生苤圭呈Q! Q 生! 旦筮! ! 鲞筮! 翅垡墮璺! 看墾!型! ：皇! Q堅! !! 碰：』! ! ： 蘭Q! Q! ! ! !： ! ! ：型

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　　C h a n n e l s rP E — A 1

　　對照；B ：O X A ( 1 Ix g ／m 1) ；C ：復(fù)方苦參( 5 0 1a ． 1／n d ) ；D ：復(fù)方苦參( 5 0 1~ l／m 1 ) + O X A ( 1 “g

　　圖2 藥物作用4 8 h 后S M M C ． 7 7 2 1 細(xì)胞周期散布情形

　　糞一三二≤}≤I。喜‘；" 6-三≤

　　一三，，；：享二妻；{二三

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　　～：陽性對照；B ：陰性對比；c ：復(fù)方苦參( 2 5 斗∥ m 】) ；D ：O X A ( 1 g g ／m 1 ) ；E ：復(fù)方苦參( 2 5 肛】／m J ) + O X A ( 1 雌

　　圖3 T U N E L 法檢測藥物作用4 8 h 對S M M C ． 7 7 2 1 細(xì)胞凋亡的影響( × 2 0 0 )

　　▲

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　　I ：復(fù)方{

　　2 ：0 X A (

　　3 ：復(fù)方{

　　5 0 “l(fā)／m 1) ， A ：活細(xì)胞；B ：早期凋亡細(xì)胞；C ：死細(xì)胞

　　m 1 ) ， A ：晚期凋亡細(xì)胞；B ：死細(xì)胞

　　5 0 1x l ／m 1 ) + O X A ( 1 斗g／m 1 ) ， A ：晚期凋亡細(xì)胞；B ：死細(xì)胞

　　圖4 熒光顯微鏡觀察藥物作用S M M C ． 7 7 2 2 1 細(xì)胞形態(tài)的變化( A O／E B × 2 0 0 )

　　床研究結(jié)果尚待揭曉。復(fù)方苦參含有苦參堿、氧化

　　苦參堿、槐定堿等多種活性成分.

　　。已有研究發(fā)

　　現(xiàn)，苦參堿可以抑制肺癌A 5 4 9 細(xì)胞和肝癌S M M C 一

　　7 7 2 1 細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移， 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。引

　　。有報道

　　復(fù)方苦參對肺腺癌細(xì)胞( L A C ) 、L e w i s 肺癌和肝癌

　　H e p 、H 2 2 細(xì)胞增殖均有克制作用一j

　　；對S G C - 7 9 0 1 、

　　H e p G 2 和B e l - 7 4 0 2 細(xì)胞株亦有顯明的抑制造用，可

　　將H e p G 2 和S G C 一7 9 0 1 細(xì)胞的周期阻滯于G ：期，誘

　　導(dǎo)細(xì)胞凋亡㈨’

　　。復(fù)方苦參與OX A 聯(lián)合對抑制肝癌

　　細(xì)胞的增殖、引誘凋亡是否會起到協(xié)同增效作用目

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　　2010年1月第15卷第1期 Chinese Clinical Oncology，Jan．2010，Vo1．15

　　前尚未見相干報道，因此我們選擇將這兩種藥物聯(lián)

　　合作用于SMMC7721細(xì)胞，觀察其相互影響。

　　本試驗通過MrITr法發(fā)明復(fù)方苦參對肝癌

　　SMMC-7721細(xì)胞株的增殖有顯著的抑制造用。從

　　時效曲線可以看出，隨著復(fù)方苦參濃度的增添和作

　　用時間的延長，對SMMC-7721細(xì)胞的抑制率逐漸上

　　升，闡明它的抑制造用具有必定的劑量和時間依附

　　性；同樣OXA的作用亦具有劑量、時間依附性。根

　　據(jù)MTY實驗的成果，參照各藥的Ic 。的濃度，我們

　　選擇了濃度為50ixt／ml的復(fù)方苦參與1 g／ml的

　　OXA聯(lián)合作用于SMMC一7721細(xì)胞，成果表明，當(dāng)

　　50ixl／ml的復(fù)方苦參和1 g／ml的OXA結(jié)合作用

　　24h和72h時，其抑制增殖的后果較單藥作用時大

　　大加強(qiáng)，表示為相加作用；作用48h時表現(xiàn)為協(xié)同作

　　用，闡明復(fù)方苦參對OXA具有協(xié)同增效作用。

　　細(xì)胞凋亡與腫瘤的產(chǎn)生、發(fā)展、消退等存在著密

　　切的接洽。肝癌的敏捷生長是癌細(xì)胞增殖與凋亡調(diào)

　　控失衡的結(jié)果。誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡是肝癌治療的重

　　要方式之一。本實驗通過TUNEL法和熒光染色法

　　察看了復(fù)方苦參和OXA單藥及其兩藥結(jié)合對肝癌

　　細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果表明，復(fù)方苦參和OXA單藥

　　均能誘導(dǎo)SMMC．772 l細(xì)胞凋亡，二者聯(lián)合運(yùn)用時細(xì)

　　胞凋亡率顯明進(jìn)步，與單藥相比，具有統(tǒng)計學(xué)意義

　　(P<0．05)。流式細(xì)胞術(shù)剖析發(fā)明，復(fù)方苦參和

　　OXA對SMMC．7721細(xì)胞的周期均發(fā)生了阻滯作

　　用，使SMMC一7721細(xì)胞G。／G，期比例增高，而S期

　　細(xì)胞比例降落；當(dāng)兩藥聯(lián)合后，這種作用得到了明顯

　　增強(qiáng)，闡明復(fù)方苦參聯(lián)合OXA抗肝癌的作用是通過

　　將SMMC一7721細(xì)胞周期阻滯在G。／G．期，從而阻斷

　　細(xì)胞的生長和決裂而實現(xiàn)的。

　　綜上所述，復(fù)方苦參與OXA聯(lián)合利用對肝癌

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　　SMMC7721細(xì)胞有良好的協(xié)同增效作用，表明中藥

　　與化療藥物聯(lián)合運(yùn)用能進(jìn)步肝癌療效。這一研究結(jié)

　　果既為臨床中藥與化療結(jié)合治療肝癌供給了試驗依

　　據(jù)，亦為肝癌治療供給了一個有價值的聯(lián)合治療方

　　案，值得我們進(jìn)一步研討與探討。

　　參考文獻(xiàn)

　　顯微鏡

　　3]

　　4]

　　熒光顯微鏡

　　顯微鏡

　　7]

　　[8 j

　　9]

　　10]

　　莊國芳，顧炳岐．復(fù)方苦參注射液治療中、晚期惡性腫瘤臨床

　　察看[J]．上海醫(yī)藥，2006，27 7：323—327．

　　陳堅，梅琪，徐迎春，等．復(fù)方苦參注射液對惡性腫瘤患

　　者伽瑪?shù)斗派渲委熀骉淋巴細(xì)胞亞群的影響[Jj．中西醫(yī)結(jié)

　　合學(xué)報，2006，4(1)：78—79．

　　司徒鎮(zhèn)強(qiáng)．吳軍正．細(xì)胞培養(yǎng)[M]．北京：世界圖書出版公司，

　　2007：200．

　　張燕，左國慶．湯為學(xué)．奧沙利鉑對人肝癌細(xì)胞株HepG2體

　　外增殖的影響[J]．中華肝臟病雜志，2004，(6)：374—377．

　　秦叔逵，曹夢苒，錢軍，等．奧沙利鉑為主的FOLFOX計劃

　　治療晚期原發(fā)性肝癌[J]．臨床腫瘤學(xué)雜志，2005，10(1)：58

　　— 62．

　　錢洪，金涌．以奧沙利鉑為主的計劃治療晚期原發(fā)性肝

　　癌的療效觀察[J]．安徽醫(yī)藥，2007，11(7)：593—597．

　　田娟，王維皓，高慧敏，等．HPLC測定復(fù)方苦參注射液中

　　苦參堿、槐定堿和氧化苦參堿的含量[J ．中國中藥雜志，

　　2007，32：222—224．

　　Zhang Y。Zhang H，Yu P，et a1． Effects of matrine against the

　　growth of human lung cancer and hepatoma cells as well as lung

　　cancer cell migration[J]．Cytoteehnolo~,，2009，59(3)：191

　　— 2oo．

　　林麗珠，周岱翰，陳瑤，等．復(fù)方苦參注射液對肺癌和肝癌

　　細(xì)胞抑瘤作用研究[J]．中藥新藥與臨床藥理，2009，20(1)：

　　21—23．

　　李芮，杜健鵬，侯仰韶，等．復(fù)方苦參注射液對SGC一7901、H

　　epG2和BEL~402腫瘤細(xì)胞作用的實驗研究[J ．腫瘤研究

　　與臨床，2006，18(1)：8—10．

　　收稿日期：2009—10—10； 修回Ft期：2009—1I一08


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