為了克服相差法觀察時(shí)樣品細(xì)節(jié)像周圍伴隨有光暈,會(huì)掩沒掉本來應(yīng)該看見的細(xì)節(jié),以及樣品或組織切片厚度要求相當(dāng)薄,原則上下能厚于10mm等局限性,利用雙光束干涉的原理設(shè)計(jì)子微分干涉相襯法。
顯微鏡成像光路系統(tǒng)調(diào)整方法:
a. 必須在庫勒明系統(tǒng)已調(diào)好的基礎(chǔ)上才能調(diào)好DIC方法;
b. 先用10×物鏡,以明視野先確定好能把樣品看清晰的物鏡調(diào)焦位置;
c. 把起偏器(polarizer)擺入照明光路中,注意其取向應(yīng)為東—西方向;
d. 把聚光鏡轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)到與10×物鏡對(duì)應(yīng)使用的位置上,即DIC 0.3—0.4;
e. 在物鏡后方或物鏡轉(zhuǎn)換器上插入10×物鏡使用的DIC插片(DIC slider);
f. 把檢偏器(analyser)插入成像光路中,注意其取向應(yīng)為南—北方;
g. 換上待觀察的透明樣品,開亮光源把樣品調(diào)焦清晰;
h. 調(diào)節(jié)DIC插片,使微分干涉相襯的像達(dá)到Zui佳效果,也就是浮雕效果Zui為明顯;
i. 同時(shí)可調(diào)節(jié)聚光鏡的孔徑光闌,使反差的效果也達(dá)到Zui佳;
j. 然后再細(xì)微調(diào)樣品的細(xì)節(jié),可見樣品中不同層面上的結(jié)構(gòu);
k. 如果把補(bǔ)色器(first order red retardation plate)插入,并同時(shí)調(diào)節(jié)DIC插片,可在視野中看到不斷變化的絢麗色彩,紅、橙、黃、綠、藍(lán)、紫、粉紅、粉紫及金黃色都具有。適用范圍:透明或不能染色的組織切片,厚度可達(dá)100?m左右,培養(yǎng)中的活組織和活細(xì)胞、小生生物等。
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