顯微鏡,顯微鏡價(jià)格,顯微鏡的價(jià)格

　　※營(yíng)養(yǎng)衛(wèi)生食品科學(xué)2006, Vol. 27, No. 09 241

　　素、一氧化氮表達(dá)的影響研究[J]. 中華兒科雜志, 2002, 40(9): 550-

　　554.

　　熒光顯微鏡 Zhang K D, Xu D M, Wang P. Microencapsulation method[J]. Journal

　　of Functional Polymers, 2001, 14(4): 474-480.

　　顯微鏡 劉袖洞, 何洋, 劉群, 等. 微膠囊及其在生物醫(yī)學(xué)范疇中的利用[J].

　　科學(xué)通報(bào), 2000, 45(23): 2476-2485.

　　熒光顯微鏡 Amory J K, Anawalt B D, Blaskovich P D, et al. Testosterone release

　　from a subcutaneous, biodegradable microcapsule formulation (Viatrel)

　　in hypogonadal men[J]. Journal of Andrology, 2002, 23(1): 84-91.

　　Nikon Boute N, Gribouval O, Roselli S, et al. NPSH2, encoding the glomerularproteinPodocin,

　　ismutatedinautosomalrecessivesteroid-resistant

　　nephritic syndrome[J]. Nat Genet, 2000, 24(4): 349-353.

　　熒光顯微鏡 Roselli S, Gribouval O, Boute N, et al. Podocin localizes in the kidney

　　to the slit diaphragm area[J]. Am J Pathol, 2002, 160(1): 131-138.

　　收稿日期：2005-10-26

　　基金項(xiàng)目：江蘇省教導(dǎo)廳自然科學(xué)研究項(xiàng)目(01KJD310003)；江蘇大學(xué)高等人才啟動(dòng)金項(xiàng)目(05JDG024)

　　作者簡(jiǎn)介：楊小明( 1 9 6 3 - ) ，女，副教授，博士，研究方向?yàn)樽匀划a(chǎn)物有效成分的提取及活性研究。

　　銀杏中銀杏酸誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞U937

　　凋亡的研究

　　楊小明1 , 3，陳永昌2，陳 鈞3，謝吉民1

　　(1.江蘇大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212013；2.江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212002；

　　3. 江蘇大學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212013)

　　摘 要：目標(biāo)：研究銀杏酸體外對(duì)U937 細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，探討其作用機(jī)理。方式：采用MTT 法檢測(cè)銀杏

　　酸對(duì)U937 細(xì)胞增殖的影響，激光共聚焦顯微鏡察看細(xì)胞形態(tài)的變更，DNA 瓊脂糖電泳檢測(cè)其生化特點(diǎn)的轉(zhuǎn)變，流

　　式細(xì)胞儀剖析細(xì)胞凋亡率。成果：U937 細(xì)胞經(jīng)銀杏酸作用24～48h，細(xì)胞的生長(zhǎng)顯明被克制；銀杏酸作用28h 出

　　現(xiàn)了細(xì)胞皺縮、核濃縮、體積縮小等顯著的凋亡的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)；細(xì)胞D N A 經(jīng)瓊脂糖電泳可見典范的梯形條帶；

　　10.0μg/ml 的銀杏酸作用40h 后，細(xì)胞凋亡率為14%。結(jié)論：銀杏酸對(duì)U937 細(xì)胞具有明顯的抗腫瘤活性，其作用

　　機(jī)理與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。

　　要害詞：銀杏酸；U 9 3 7 細(xì)胞；凋亡；M T T

　　Apoptosis Study on Human or Leukaemia Cell Line U937 Induced by Ginkgolic Acids from Ginkgo biloba L.

　　YANG Xiao-ming1,3，CHEN Yong-chang2，CHEN Jun3，XIE Ji-min1

　　(1.School of Chemistry and Chemical Engineering, Jiangsu University, Zhenjiang 212013, China；

　　2.School of Medicine, Jiangsu University, Zhenjiang 212002, China；

　　3.School of Bio-environment Engineering, Jiangsu University, Zhenjiang 212013, China)

　　Abstract ：To investigate the inhibition effects of ginkgolic acids on U937 cells in vitro and its anti-tumor mechanism. Method:

　　The growth inhibition effects of ginkgolic acids on U937 cell were assayed by MTT method. Changes of U937 cell morphologic

　　character were observed under laser focusing microscope. Bio-chemistry characteristics of cell apoptosis was observed by DNA

　　agarose electrophoresis. Apoptosis rate of U937 was analyzed by FCM. Result: Ginkgolic acids shows obvious inhibiting effect

　　on cell growth after culturing U937 cell with it for 24～48h. Exposure U937 cell to ginkgolic acids for 28h, that ginkgolic acids

　　make the U937 nucleolus shrink in volume, darken in color, distort in shape. U937 cells show morphologic characteristics of cell

　　apoptosis. U937 cell DNA appeare DNA ladder type in agarose electrophoresis. Exposing U937 cell to 10.0μg/ml ginkgolic acids

　　for 40h, the apoptosis rate is 14%. Conclusion: Ginkgolic acids show an anti-tumor activity through inducing apoptosis in

　　tumourcell.

　　242 2006, Vol. 27, No. 09 食品科學(xué)※養(yǎng)分衛(wèi)生

　　Key words：Ginkgolic acids；U937 cell；apoptosis；MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-z-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium

　　Bromide)

　　中圖分類號(hào)：Q946 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1002-6630(2006)09-0241-06

　　銀杏酸(Ginkgolic acids，GAs)存在于銀杏(Ginkgo

　　biloba L.)的葉、果和外種皮中，在未經(jīng)特別處置的銀

　　杏葉提取物(EGb，Extract of Ginkgo biloba)中，銀杏酸

　　的含量一般為(600～1500)× 10－ 6，Zui高可達(dá)1%顯微鏡左右。

　　國(guó)內(nèi)和日本市場(chǎng)上銷售的銀杏茶中，銀杏酸的含量也高

　　達(dá)0.27%～1.18%[2,3]。銀杏酸是6- 烷基或6- 烯基水楊酸

　　的衍生物，六位上的側(cè)鏈碳原子數(shù)可從13 至19，側(cè)鏈

　　雙鍵數(shù)可為0 至3 個(gè)，為一同系物的混雜物(見圖1)。銀

　　杏酸被以為具有皮膚致敏作用及細(xì)胞毒性，因此銀杏葉

　　提取物中被限量在5 × 10－ 6 以下熒光顯微鏡。研究發(fā)明，銀杏酸

　　具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用[4 ～7]，但其抑制機(jī)制至今

　　尚未見報(bào)道。為進(jìn)一步研究銀杏酸對(duì)腫瘤細(xì)胞的影響，

　　我們以U937 細(xì)胞為試驗(yàn)瘤株，探討銀杏酸對(duì)U937 細(xì)胞

　　生長(zhǎng)抑制造用的可能機(jī)制，為進(jìn)行新藥開發(fā)供給基本。

　　四氮唑藍(lán)(MTT)、蛋白酶K 、碘化丙啶(PI)、R N A 酶

　　Sigma 公司；溴化乙啶(EB)、吖啶橙(AO) Fluka 公司

　　分裝；DMEM 培養(yǎng)基、小牛血清 Gibco 公司；二甲

　　基亞砜(DMSO，Acs Grade) Amresco 分裝；SDS 南

　　京生興生物技巧有限公司；低熔點(diǎn)瓊脂糖、正常熔點(diǎn)瓊

　　脂糖 Spanish分裝；Triton X-100 Amresco分裝；Tris

　　Base(Molecular Biology Grade) Promega Corporation；柱

　　層析用硅膠G(100～140目) 上?；瘜W(xué)試劑公司；其余

　　試劑均為分析純。

　　銀杏酸對(duì)照品1 由德國(guó)Schwabe 公司H.Jaggy 博士

　　贈(zèng)予，純度9 9 % 以上。

　　銀杏酸對(duì)照品2 中國(guó)藥科大學(xué)，單體C13:0 銀杏酸純

　　度9 5 % 。

　　銀杏外種皮采收于江蘇大學(xué)校園，曬干后密封保

　　存。

　　1.1.3 細(xì)胞株 U937細(xì)胞 上海細(xì)胞所，由江蘇大學(xué)

　　醫(yī)學(xué)技巧學(xué)院保留。

　　1.2 辦法

　　1.2.1 銀杏酸的制備和純度測(cè)定

　　將銀杏外種皮剪碎后，按1:5 的比例加入石油醚(沸

　　程60～90℃)超聲萃取1h，過濾，濾渣反復(fù)提取兩次，

　　合并提取液，揮往石油醚得浸膏。浸膏用少量石油醚

　　溶解后，加樣于硅膠柱上(硅膠120g，φ 32 × 400mm 玻

　　璃柱，濕法裝柱)，石油醚- 乙醚- 甲酸(89:11:1，V/V/

　　V)洗脫，以GF254 薄層層析(展開劑為石油醚- 乙醚- 甲酸,

　　70:30:1)在254nm處出現(xiàn)藍(lán)紫色熒光為監(jiān)測(cè)，收集銀杏酸

　　組分，濃縮至干；反復(fù)過柱，得到的銀杏酸組分水洗

　　至中性，無水N a S O 4 干燥后，揮往溶劑，得銀杏酸同

　　系混雜物。

　　銀杏酸的確認(rèn)及純度測(cè)定參見文獻(xiàn)Nikon，分析色譜

　　工作條件：流動(dòng)相為甲醇-3% HAc 溶液(92:8，V/V)，

　　流速1.0ml/min，柱溫40℃，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)310nm。

　　1.2.2 細(xì)胞培育

　　U937 細(xì)胞采取DMEM 培育液，內(nèi)含10% 小牛血清、

　　1 × 105U/L 青霉素和125mg/L 的鏈霉素，慣例傳代，置

　　37℃、5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

　　1.2.3 銀杏酸對(duì)U937 細(xì)胞生長(zhǎng)的影響

　　銀杏酸以D M S O 配制成不同濃度溶液備用。

　　取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的U937 細(xì)胞，配制成5 × 104/L 的單

　　細(xì)胞懸液，分裝于96 孔造就板中，每孔200μl ，同時(shí)

　　加入2μl 含不同濃度銀杏酸的D M S O 溶液，培養(yǎng)液中

　　圖1 銀杏酸構(gòu)造圖

　　Fig.1 Structure of Ginkgolic acids

　　C O O H

　　O H

　　R

　　R=C13H27(C13:0)，R=C15H31(C15:0)

　　R=C15H29(C15:1)，R=C17H33(C17:1)

　　R=C17H31(C17:2)

　　1 資料與方式

　　1.1 資料

　　1.1.1 儀器

　　μQuant MQX200 酶標(biāo)儀 Bio-TEK Instruments

　　INC；Radiance 2100激光共聚焦顯微鏡 Bio-Red公司；

　　FACSC alibur 流式細(xì)胞儀 Becton Dickinson 公司；

　　Nikon Eclipse TE300 熒光顯微鏡；HITACH 高速離心

　　機(jī)；程度電泳槽及DYY-6B 型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀；Alpha

　　凝膠成像體系；Mettler AE240 型電子剖析天平；1810B

　　型主動(dòng)雙重純水蒸餾器，MM-1 微型混和器，HH 恒溫

　　水浴鍋。

　　LC-1500 高效液相色譜儀 日本JASCO 公司；

　　1575UV/VIS 紫外檢測(cè)器；分析色譜柱：HiQ SiL C18(4.6mm

　　× 250mm，5μm) KYA TECH Corporation。

　　1.1.2 試劑

　　絲裂霉素C(MMC) Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd.；

　　※營(yíng)養(yǎng)衛(wèi)生食品科學(xué)2006, Vol. 27, No. 09 243

　　D M S O 含量不超過0 . 1 % 。細(xì)胞對(duì)照組用D M S O 取代銀

　　杏酸，空缺組用D M E M 取代細(xì)胞懸液和銀杏酸，各組

　　設(shè)6 個(gè)平行孔，置37℃培養(yǎng)24、36、48h，實(shí)驗(yàn)終止

　　前4h 參加10μl 5mg/ml 的MTT 生理鹽水溶液，持續(xù)培

　　養(yǎng)4 h ，棄上清液，加入D M S O ，充足振蕩待孔內(nèi)結(jié)晶

　　溶解后，用空缺調(diào)零，置于490nm 波長(zhǎng)酶標(biāo)儀測(cè)定A490

　　值，按下列公式求誕生長(zhǎng)克制率。

　　生長(zhǎng)抑制率IR(%) = (1－用藥組A490 值/ 對(duì)照組A490

　　值)× 100%

　　1.2.4 單細(xì)胞凝膠電泳檢測(cè)

　　實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)按參考文獻(xiàn)[ 9 ]辦法進(jìn)行。電泳停止后，

　　EB 染色，在熒光顯微鏡下每張電影隨機(jī)視察50 個(gè)細(xì)胞

　　(2 張/ 組)，彗星拖尾長(zhǎng)度在Photoshop 7.0 圖象處理系

　　統(tǒng)中進(jìn)行計(jì)數(shù)。在放大200 倍的圖片中，以同樣亮度為

　　彗星中心，作彗核心，記載坐標(biāo)( X 1 ，Y 1 ) ；亮度R e d

　　200 作為慧核心的邊沿，記載慧核心邊坐標(biāo)(X2，Y 2) ；

　　以亮度Red5 為彗星尾的終點(diǎn)，記載慧尾坐標(biāo)(X3，Y3)。

　　彗星頭長(zhǎng)=2×彗星核半徑 = 2×[(X1－X2)2 + ( Y1－

　　Y2)2]1/2；

　　彗星核到慧尾長(zhǎng)=[(X1 － X3)2 + (Y1 － Y3)2]1/2；

　　慧尾長(zhǎng)= 彗星核到慧尾長(zhǎng)－彗星核半徑；

　　每實(shí)驗(yàn)組共記數(shù)50 個(gè)拖尾細(xì)胞，盤算均勻彗星頭

　　長(zhǎng)和拖尾長(zhǎng)度，單位以像素計(jì)。

　　并盤算各組DNA 斷裂細(xì)胞的百分率。用SAS8.2 軟

　　件進(jìn)行方差檢驗(yàn)。

　　1.2.5 激光共聚焦顯微鏡視察

　　將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞移進(jìn)24 孔板中，培育24h 后，

　　在其中參加濃度為10.0μg/ml 的GAs 溶液，以0.1% DMSO

　　為陰性對(duì)照，持續(xù)造就28h 后，加0.1% 吖啶橙生理鹽

　　水溶液10μl，于37℃造就箱中避光染色20min 后，用

　　P B S 洗去過剩染液，滴片，上機(jī)分析。

　　1.2.6 D N A 凝膠電泳分析

　　U937 細(xì)胞經(jīng)不同濃度的GAs 作用24h 后，1000r/min

　　離心1 0 m i n 收集各組細(xì)胞，用冷P B S 洗兩次，加入

　　裂解液500μl(Tris-HCl 10mmol/L，EDTA10mmol/L，NaCl

　　150mmol/L，0.4% SDS)，2.5μl，20mg/ml 蛋白酶K

　　37 ℃過夜，分辨用平衡酚、氯仿: 異戊醇(24:1) 抽提

　　6000r/min 離心10min 分別，上清液參加2 倍體積冷乙醇

　　充足混勻后12000r/min離心10 min，傾往上清液，用75%

　　冷乙醇洗滌沉淀，晾干后T E 液溶解，以1 . 5 % 瓊脂糖

　　電泳，E B 染色，紫外線下察看照相。

　　1.2.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)D N A 含量

　　分辨收集藥物處置組和對(duì)照組的細(xì)胞，用預(yù)冷的

　　PBS 洗兩次，滴進(jìn)4℃預(yù)冷70% 乙醇中，于4 ℃固定過

　　夜。棄固定液，細(xì)胞用P B S 漂洗2 次，加入R N a s e 、

　　37℃水浴30min。水浴后立即放入冰塊中，以結(jié)束RNase

　　的作用。加入PI 染色液混勻，在4℃避光40min。400

　　目標(biāo)篩網(wǎng)過濾后上機(jī)測(cè)定。低于G1 期DNA 含量的細(xì)胞為

　　凋亡細(xì)胞。計(jì)數(shù)10000 個(gè)細(xì)胞測(cè)定各期DNA 含量，盤算

　　凋亡細(xì)胞百分率和察看凋亡峰。試驗(yàn)成果采取SAS 8.2 軟

　　件進(jìn)行方差檢驗(yàn)。

　　2 結(jié)果與分析

　　2.1 銀杏酸的制備和純度測(cè)定

　　銀杏外種皮經(jīng)石油醚提取得到粗提物。粗提物經(jīng)硅

　　膠柱層析，收集到的銀杏酸經(jīng)TLC 檢測(cè)為單一斑點(diǎn)。經(jīng)

　　多次柱層析，所得銀杏酸同系混雜物經(jīng)HPLC 外標(biāo)法測(cè)

　　定其純度90% ，按面積回一法測(cè)定其重要組成為C 1 3 : 0，

　　20.7%；C15:1，51.6%；C17:1，21.1%；C17:2 和C15:0 各為

　　3.3%。

　　2.2 銀杏酸對(duì)U937 細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制造用

　　銀杏酸對(duì)U937 細(xì)胞生長(zhǎng)浮現(xiàn)顯著的抑制作用，見

　　圖2 。在同一作用時(shí)間內(nèi)，隨著銀杏酸濃度的增大，抑

　　制造用加強(qiáng)，當(dāng)銀杏酸濃度增添到50μg/ml 時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)

　　抑制率到達(dá)Zui大，24h 時(shí)抑制率為61%，48h 時(shí)為79%；

　　此后再增添濃度，細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率反而下降。而同

　　一藥物濃度，作用時(shí)光越長(zhǎng)，生長(zhǎng)抑制率越高。

　　24h

　　36h

　　48h

　　100

　　80

　　60

　　40

　　20

　　0

　　5 10 30 50 100

　　細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率(%)

　　銀杏酸濃度(μg/ml)

　　24h

　　36h

　　48h

　　圖2 不同濃度銀杏酸對(duì)U937 細(xì)胞生長(zhǎng)的影響

　　Fig.2 The effect on growth of U937 cell by different concentration

　　ginkgolic acids

　　2.3 銀杏酸引誘U937 細(xì)胞DNA 鏈斷裂

　　在顯微鏡下細(xì)胞D N A 呈桔紅色，正常細(xì)胞

　　D N A 呈圓形，損傷細(xì)胞D N A 發(fā)生鏈斷裂，斷片朝陽(yáng)極

　　遷移，形成彗星樣的拖尾，呈梭形或放射狀，見圖3 。

　　溶劑對(duì)照(DMSO)組細(xì)胞大多未涌現(xiàn)DNA 遷移，而

　　表示為一個(gè)圓形的熒光頭，少數(shù)細(xì)胞涌現(xiàn)拖尾，但彗

　　星尾長(zhǎng)很短。而陽(yáng)性對(duì)比組細(xì)胞全體呈現(xiàn)D N A 遷移，

　　其彗星尾長(zhǎng)而寬。在同樣條件下，用0.1～1.0μg/ml 的

　　銀杏酸作用U937 細(xì)胞1.5h，其存活率未受明顯影響。

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在作用劑量范疇內(nèi)，銀杏酸可不同程

　　度地引誘細(xì)胞D N A 鏈的斷裂，與溶劑對(duì)比組相比，各

　　劑量組NDA 斷裂細(xì)胞百分率及其DNA 遷移間隔均顯明

　　244 2006, Vol. 27, No. 09 食品科學(xué)※養(yǎng)分衛(wèi)生

　　增添，且浮現(xiàn)良好的量效關(guān)系，見表1 。

　　2.4 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察

　　組別

　　濃度D N A 斷裂細(xì)胞百分率拖尾長(zhǎng)度

　　(μg/ml) (%) (像素，x ± s)

　　D M S O 1.0 13.2 6.90±3.33*

　　0.1 84.1 10.06±6.33*

　　GAs 0.5 100 10.80±6.97*

　　1.0 100 12.99±7.13*

　　M M C 4.5 100 14.76±6.89*

　　表1 GAs 對(duì)人U937 細(xì)胞DNA 的損傷

　　Table 1 DNA strand breaks in human U937 cell by ginkgolic acids

　　注：*p ＜ 0.01 vs DMSO 組。

　　圖4 為在激光共聚焦顯微鏡下AO 染色的U397 細(xì)胞

　　D N A 的形態(tài)。圖A 為D M S O 處理組的細(xì)胞，可見細(xì)胞

　　形態(tài)正常，核浮現(xiàn)均勻淺黃綠色熒光。圖B 為經(jīng)處置

　　組的細(xì)胞，10.0μg/ml 銀杏酸作用28h 后，細(xì)胞質(zhì)濃染、

　　核濃縮、體積縮小，并可見黃色碎片出現(xiàn)了凋亡細(xì)胞

　　特征性的形態(tài)學(xué)轉(zhuǎn)變。

　　2.5 D N A 瓊脂糖凝膠電泳

　　U937 細(xì)胞經(jīng)0.1、1.0、10.0μg/ml 的銀杏酸和

　　4.5μg/ml 絲裂霉素作用24h 后的DNA 電泳圖形見圖5。

　　未經(jīng)藥物處理的正常組細(xì)胞和經(jīng)0.1μg/ml銀杏酸處

　　理的細(xì)胞均未呈現(xiàn)顯明的D N A “梯型”條帶，也未觀

　　察到壞逝世細(xì)胞DNA 的“帶狀”條帶。濃度為1.0μg/ml

　　※營(yíng)養(yǎng)衛(wèi)生食品科學(xué)2006, Vol. 27, No. 09 245

　　和10.0μg/ml 的銀杏酸作用于U937 細(xì)胞24h 后，瓊脂

　　糖電泳出現(xiàn)明顯的D N A “梯型”條帶，大約相當(dāng)于

　　180～200bp 的整數(shù)倍，提醒DNA 在核小體間斷裂，呈

　　現(xiàn)細(xì)胞凋亡的典范特征。而高濃度銀杏酸(≥ 1.0μg/ml)

　　能明顯誘導(dǎo)U937 細(xì)胞的凋亡，與陽(yáng)性組絲裂霉素一致。

　　2.6 細(xì)胞凋亡率的分析

　　流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果表明：銀杏酸可誘導(dǎo)U937 細(xì)

　　胞呈現(xiàn)亞G 1 峰，再次證實(shí)了D N A 凝膠電泳的結(jié)論：銀

　　杏酸能誘導(dǎo)U937 細(xì)胞產(chǎn)生凋亡。見圖6 。銀杏酸誘導(dǎo)

　　細(xì)胞凋亡的作用呈劑量依附性，溶劑對(duì)比組，細(xì)胞凋

　　圖6 流式細(xì)胞儀分析不同劑量銀杏酸對(duì)U937 細(xì)胞凋亡的作用

　　Fig.6 Analysis the effect of different doses of ginkgolic acids on

　　U937 apoptosis by flow cytometer

　　A：Control ；B：GAs 0.1μg/ml；C：GAs 0.5μg/ml；D：GAs

　　1.0μg/ml；E：GAs 10.0μg/ml。

　　亡率約2.4%；實(shí)驗(yàn)組中，當(dāng)銀杏酸濃度為0.1、0.5μg/ml

　　時(shí)，細(xì)胞凋亡率分辨為3.3% 和4.4%，與對(duì)照組的凋亡

　　率發(fā)生了明顯差別(p ＜ 0.05)；當(dāng)銀杏酸濃度為1.0 和

　　10.0μg/ml 時(shí)，細(xì)胞凋亡率到達(dá)11% 和14%。

　　3 討 論

　　在腫瘤的治療手腕中，化學(xué)藥物的治療是發(fā)展Zui快

　　的一個(gè)范疇，從自然產(chǎn)物中尋找抗腫瘤藥物或先導(dǎo)物是

　　一條高效的道路。隨著分子生物學(xué)的敏捷發(fā)展，人們

　　已將殺傷型細(xì)胞毒藥物的發(fā)展策略轉(zhuǎn)向針對(duì)新靶點(diǎn)、提

　　高選擇性、探討新的作用機(jī)理、尋找新型化學(xué)構(gòu)造這

　　一方向。

　　有關(guān)腫瘤產(chǎn)生發(fā)展分子機(jī)制的研討表明，在惡性

　　腫瘤細(xì)胞中，細(xì)胞內(nèi)的各種基礎(chǔ)進(jìn)程均有調(diào)節(jié)失控。

　　這些進(jìn)程包含：信號(hào)傳遞、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、

　　血管天生、端粒酶的穩(wěn)固性以及胞外基質(zhì)的相互作

　　用。

　　為研制出具有特異性的藥物，研究者應(yīng)用腫瘤細(xì)胞

　　246 2006, Vol. 27, No. 09 食品科學(xué)※養(yǎng)分衛(wèi)生

　　分子生物學(xué)上的Zui新發(fā)現(xiàn)，將注意力轉(zhuǎn)向腫瘤產(chǎn)生發(fā)展

　　進(jìn)程中起作用的特異的分子及生物靶點(diǎn)，以追求新型抗

　　腫瘤藥物。如細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑、信號(hào)傳導(dǎo)阻滯劑、血

　　管天生抑制劑。因此近年來有關(guān)自然產(chǎn)物與腫瘤細(xì)胞周

　　期和腫瘤凋亡關(guān)系的研究非常活潑。

　　楊小明等熒光顯微鏡研究發(fā)現(xiàn)銀杏酸濃度≤ 5.0μg/ml 時(shí)，對(duì)

　　轉(zhuǎn)化的正凡人腎臟293 細(xì)胞和小鼠NIH/3T3細(xì)胞的生長(zhǎng)幾

　　乎不產(chǎn)生影響；但對(duì)人肺癌LTEP-a-2、A549 細(xì)胞和白

　　血病U937 細(xì)胞生長(zhǎng)均產(chǎn)生明顯抑制作用，其中對(duì)LTEPa-

　　2 瘤株的抑制率達(dá)59.1%。

　　本實(shí)驗(yàn)采用人白血病U937 細(xì)胞為試驗(yàn)細(xì)胞株，觀

　　察了銀杏酸對(duì)其作用后形態(tài)、生化特征等各方面的變

　　化。以探討其作用機(jī)制。

　　細(xì)胞凋亡過程中常隨同有細(xì)胞形態(tài)的變更，形態(tài)學(xué)

　　變化是分析細(xì)胞凋亡的有效方式。本實(shí)驗(yàn)采用體外培

　　養(yǎng)，經(jīng)特定染色后在激光共聚焦顯微鏡下進(jìn)行視察，結(jié)

　　果顯示經(jīng)銀杏酸10μg/ml 處理28h 后，U937 細(xì)胞出現(xiàn)皺

　　縮變形、體積縮小、核濃縮、并涌現(xiàn)黃色碎片等細(xì)胞

　　凋亡的典范形態(tài)變更特點(diǎn)。采取瓊脂糖凝膠電泳技巧，

　　發(fā)明U937 細(xì)胞經(jīng)1.0μg/ml 的銀杏酸作用24h 后，其DNA

　　出現(xiàn)明顯的“梯狀”條帶，表示出現(xiàn)細(xì)胞凋亡的典型

　　生化特征。通過單細(xì)胞凝膠電泳發(fā)現(xiàn)低濃度的銀杏酸即

　　能造成U937 細(xì)胞DNA 鏈的斷裂，產(chǎn)生斷裂的細(xì)胞數(shù)目

　　與斷裂水平與銀杏酸的濃度呈正比。通過流式細(xì)胞儀分

　　析了凋亡率。

　　總之，銀杏酸在低濃度時(shí)就能抑制U937 細(xì)胞等多

　　種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。1.0μg/ml 的銀杏酸能誘導(dǎo)U937 細(xì)

　　胞的凋亡?？梢娿y杏酸具有顯著的引誘腫瘤細(xì)胞凋亡、

　　克制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。

　　銀杏是我國(guó)特有的古老植物質(zhì)源，其葉、果均可

　　進(jìn)藥。目前以銀杏黃酮和內(nèi)酯為藥效成分的銀杏葉提取

　　物及其制品已成為國(guó)際公認(rèn)的預(yù)防、治療心腦血管疾病

　　的天然植物藥之一。本研究證實(shí)了銀杏酸為銀杏中的抗

　　腫瘤成分，為銀杏資源的充足開發(fā)應(yīng)用供給基本。

　　參考文獻(xiàn)：

　　熒光顯微鏡 吳向陽(yáng), 仰榴青, 陳鈞. 高效液相色譜法測(cè)定銀杏葉提取物及其制

　　劑中銀杏酸的含量[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 2003, 39(11): 846-849.

　　Nikon 吳朝陽(yáng), 仰榴青, 陳鈞.不同生長(zhǎng)季節(jié)銀杏葉中有毒成分銀杏酸含量

　　的測(cè)定[J]. 食品科學(xué), 2002, 23(12): 94-97.

　　構(gòu)造 吳向陽(yáng), 仰榴青, 陳鈞. 銀杏茶中有毒成分銀杏酸的研究[J]. 分析化

　　學(xué), 2003, 31(11): 1407.

　　NC Van Beek T A. Chemical analysis of Ginkgo biloba leaves and extracts

　　[J]. J Chromatography A, 2002, 967: 21-55.

　　激光共聚焦顯微鏡 Hideji Itokawa, Nobuo Totsuka, Keisuke Nakahara, et al. Antitumor

　　principles from Ginkgo biloba L[J]. Chem Pharm Bull, 1987, 35(7):

　　3016-3020.

　　顯微鏡 Hideji Itokawa, Nobuo Totsuks, Keisuke Nakahara, et al. A quantitative

　　structure-activityrelationshipforantitumoractivityoflong-Chinaphenols

　　from Ginkgo biloba L[J]. Chem Pharm Bull, 1989, 37(6): 1619-1621.

　　熒光顯微鏡 楊小明, 錢之玉, 陳鈞, 等. 銀杏外種皮中銀杏酸的體外抗腫瘤活性

　　研究[J]. 中藥材, 2004, 27(1): 40-42.

　　Nikon 仰榴青, 吳朝陽(yáng), 陳鈞. 高效液相色譜法測(cè)定銀杏外種皮中銀杏酸

　　的含量[J]. 分析化學(xué), 2002, 30(8): 901-905.

　　構(gòu)造 A Hartmann, E Agurell, C Beevers, et al. Recommendations for conducting

　　the in vivo alkaline comet assay[J]. Mutagenesis, 2003, 18(1): 45-51.

　　efefefef

　　信 息

　　efefefef

　　fef

　　科學(xué)家找到H5N1 禽流感病毒致命弱點(diǎn)

　　據(jù)路透社報(bào)道，科研職員發(fā)明 H5N1 病毒致命弱點(diǎn)，由此可研制新來抵抗病毒在人與人之間傳布，倫敦國(guó)度

　　醫(yī)藥研討機(jī)構(gòu)約翰·斯凱海爾引導(dǎo)的科研小組說，他們已經(jīng)在 H5N1 病毒體內(nèi)找到了某一腔室，或者說是一種神

　　經(jīng)氨酸酶，這有可能就是病毒潛在致命弱點(diǎn)。斯凱海爾告知路透社記者說：“這個(gè)新訊息給我們帶來了盼望，對(duì)

　　付 N1 神經(jīng)氨酸酶的殊效藥可以研發(fā) 成為抗衡H5N1 型病毒的新藥物。”

　　研討成果發(fā)表在《自然》上，文中寫道：“剖析表明，我們有可能斷定1 號(hào)腔室的大小和具體方位，而這

　　有助于研發(fā)新一代抗沾染藥物?！钡魏涡滤幬锏难邪l(fā)都須要數(shù)年時(shí)光，斯凱海爾坦言：“這可不是一揮而就的事

　　情。很可能要破費(fèi)五六年時(shí)光?！?

　　有一些國(guó)度已經(jīng)開端儲(chǔ)備Tamiflu 和Relenza，但由于H5N1 型 病毒經(jīng)常性變異，上述藥物難以禁止在人際間傳

　　染。斯凱海爾說：“現(xiàn)在有一系列的抗病毒藥物，有一些是專門對(duì)付H5N1 型病毒的，也有像Tamiflu 和Relenza

　　那樣抗衡其他N 病毒的，尤其對(duì)N1 有宏大藥效。但這些藥物都無法禁止病毒變異，不過值得慶幸的是它們可以控

　　制病毒發(fā)生抗藥性。這就像人類和病毒之間的賽跑。你必需領(lǐng)先于病毒的變異速度，特殊是要比H5N1 型能直接在

　　人類沾染前達(dá)到終點(diǎn)?！?


本文地址:http://www.hkxccw.cn/news/1238.html
出自: 顯微鏡報(bào)價(jià)網(wǎng) 轉(zhuǎn)載時(shí)請(qǐng)標(biāo)明出處.