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　　第十章

　　名詞說明

　　1、電子顯微鏡應(yīng)用電子波波是非，辨別力高的特色以電子流取代光學(xué)顯微鏡的光束使物體放大成象的超顯微鏡檢裝置。

　　2、普通光學(xué)顯微鏡用自然光或者燈光作光源鏡檢物體的顯微鏡。

　　3、合成培養(yǎng)基由化學(xué)成分已知的營養(yǎng)物質(zhì)配制而成的培養(yǎng)基。

　　4、培養(yǎng)基人工配制的供微生物生長滋生并積聚代謝產(chǎn)物的一種營養(yǎng)基質(zhì)。

　　5、自然培養(yǎng)基由化學(xué)成分不完整明白的自然物質(zhì)如馬鈴薯,麩皮等配制而成的培養(yǎng)基。

　　6、半合成造就基由化學(xué)成分已知的化學(xué)物資和化學(xué)成分不完整明白的自然物資配制而成的培育基。

　　7、革蘭氏染色法。革蘭氏染色是細(xì)菌的一種辨別染色法，細(xì)菌首先用結(jié)晶紫染色，再用碘液固定，然后用95%的酒精脫色,Zui后用蕃紅復(fù)染。凡是菌體初染的結(jié)晶紫被酒精脫往了紫色后，又被蕃紅復(fù)染成紅色的細(xì)菌稱為革蘭氏負(fù)反響細(xì)菌；凡是菌體初染的紫色不能被酒精脫色，也不能被蕃紅復(fù)染成紅色的細(xì)菌稱為革蘭氏正反映細(xì)菌。

　　8、簡略染色用單一染料使微生物細(xì)胞染上所用染料色彩的染色方法。

　　9、稀釋平板計數(shù)法將必定量的樣品經(jīng)十倍稀釋后，用平板培養(yǎng)Zui后三個稀釋度的樣品稀釋液。待菌落長出后，計數(shù)出某一稀釋度的菌落數(shù)后再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品中的含菌數(shù)。

　　顯微直接計數(shù)法應(yīng)用血球計數(shù)板或細(xì)菌計數(shù)板在顯微鏡下測計出每小格的微生物細(xì)胞數(shù)目后，再換算出單位體積中微生物細(xì)胞總數(shù)的測數(shù)方式。

　　10、巴氏消毒巴氏消毒是法國微生物學(xué)家巴斯德發(fā)現(xiàn)的一種消毒方法。是在62-63℃的條件下，保溫半小時殺死微生物的營養(yǎng)體(主要是病原菌)的方法。

　　11、間歇滅菌:應(yīng)用100℃的溫度殺逝世微生物的營養(yǎng)體.每次1小時持續(xù)三天，中間的空隙時光讓未殺死的芽胞萌發(fā)成營養(yǎng)體，在下一次100℃的溫度下被殺逝世。如此重復(fù)兩次可將培養(yǎng)基的微生物(包含芽胞)全體殺死。該辦法實用于沒有高壓滅菌器的處所進(jìn)行滅菌處置。

　　12、消毒只殺死微生物的營養(yǎng)體(主要是病原菌)，而不能殺死微生物的芽胞的除菌方法。

　　13、滅菌利用物理或化學(xué)方法殺逝世所有微生物包含細(xì)菌的芽胞的除菌方法稱為滅菌。

　　14、過濾除菌利用一定孔徑的濾膜禁止微生物的通過而除往溶液中或者空氣中微生物的除菌方法。

　　15、濕熱滅菌利用熱的蒸汽殺死微生物的滅菌方法。濕熱滅菌又分常壓蒸汽滅菌和加壓蒸汽滅菌。

　　16、干熱滅菌利用干熱空氣殺死微生物的方法。其滅菌工藝條件通常為160-170℃/2h。

　　17、選擇培養(yǎng)基依據(jù)應(yīng)用的目標(biāo)，把持培養(yǎng)基的組成成分，使之有利于某種微生物的生長而限制其它微生物的生長，從而能從自然界混淆的群體中分離出某一種單一的微生物。如無氮培養(yǎng)基用來分離土壤中的自生固氮菌。

　　18、加富培養(yǎng)基在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中參加血清，動植物組織液或者其它生長因子而配制出來的養(yǎng)分特殊豐盛的培養(yǎng)基。

　　19、辨別培養(yǎng)基依據(jù)微生物的代謝特色，通過唆使劑的顯色反映，用以辨別不同微生物的培養(yǎng)基。

　　20、數(shù)值孔徑數(shù)值孔徑是斷定物鏡和聚光鏡性能的主要指標(biāo)，通常用N.A表現(xiàn)。N.A=n.sinα/2(n為介質(zhì)折光率，α為鏡口角)。

　　21、辨別力辨別力是指顯微鏡能夠分辯出的物體兩點(diǎn)間Zui小間隔的才能。它與波長及物鏡的數(shù)值孔徑有關(guān)。

　　22、超凈工作臺利用過濾除菌的原理而設(shè)計出來的一種無菌操作工作臺，鼓風(fēng)機(jī)鼓出的空氣通過孔徑很小的薄膜將空氣中的微生物過濾后變成無菌空氣吹向操作臺，可防止四周有菌空氣流入，能保證操作臺始終堅持無菌狀況，便于無菌操作。

　　23、純培養(yǎng)技術(shù)純培養(yǎng)技術(shù)是培養(yǎng)某個單一微生物的方法。包含培養(yǎng)基的制造與滅菌。單一微生物的分離與純化,和無菌操作接種技術(shù)。

　　24、焦深焦深是指清楚的目標(biāo)象的上面和下面所看見的物象之間的間隔。它與放大倍數(shù)成反比，即放大倍數(shù)越大,焦深越小。

　　25、暗視野顯微術(shù)利用暗視野聚光器能禁止光線直接照耀標(biāo)本，而使光線斜射在標(biāo)本上。在顯微鏡中見到黑暗視野中明亮物象的鏡檢技巧。

　　26、熒光顯微術(shù)以紫外光作光源的顯微鏡檢技術(shù)。

　　27、負(fù)相差在黑暗視野中看到明亮物體的相差鏡檢技巧。

　　28、正相差在明亮視野中看到黑暗物體的相差鏡檢技巧。

　　五、問答題

　　1.試述在普通光學(xué)顯微鏡下測定微生物細(xì)胞大小的根本辦法。

　　測定微生物細(xì)胞的大小重要應(yīng)用目鏡測微尺。其方法如下:

　　先用長度已知的鏡臺測微尺校訂目鏡測微尺。校訂的方式是讓臺尺與目尺重疊,看臺尺的X格正好與目尺的Y格重疊，然后用盤算目尺每格的長.分辨校訂目鏡測微尺在低倍鏡,高倍鏡及油鏡下每格所代表的實際長度。

　　將待測微生物制成水浸片或染色涂片置載物臺上，調(diào)焦找到微生物后用目鏡測微尺丈量其寬幾格，長幾格,然后乘上相應(yīng)放大倍數(shù)下的校正值。

　　一般測10個微生物，然后以均勻值表現(xiàn)。

　　若是酵母、細(xì)菌等單細(xì)胞微生物,通常測其寬和長，然后以均勻?qū)?amp;acute;均勻長表現(xiàn),單位為μm。

　　2、以測蘇云金桿菌產(chǎn)業(yè)菌粉中的活菌數(shù)為例，試述稀釋平板計數(shù)的基礎(chǔ)辦法。

　?。?）.測數(shù)前先籌備好測數(shù)用的1ml無菌吸管,9cm無菌平皿，9ml試管無菌水和牛肉膏蛋白胨瓊脂造就基。

　　(2).稱取10克產(chǎn)業(yè)菌粉參加90ml無菌水中置搖床上或用手振蕩20-30分鐘，讓菌體疏散。

　　將上述振蕩過的菌液按無菌操作法進(jìn)行十倍稀釋直到10-8。

　　取9cm無菌平板皿9套用記號筆在平皿底編號，10-8編3套，10-7編3套，10-6編3套。

　　用1支1ml的無菌吸管，取1ml10-8的稀釋菌液放入編號10-8的平皿中，如此將三個反復(fù)做完。同法取10-7稀釋菌液放入三個編號為10-7平皿中。同法取10-6稀釋菌液放進(jìn)三個編號為10-6平皿中.(均要按無菌操作法做)。

　　將牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基融化冷至45-50℃后，在酒精燈火焰邊按無菌操作法倒入上述9套平皿中，每個加入量大約15-20ml，邊加邊動搖平皿,，使培養(yǎng)基與菌液充足混勻。

　　待培養(yǎng)基凝固后,將平板倒過來，置28-30℃下培養(yǎng)48小時后計數(shù)。

　　3、試述劃線分別的操作方法。

　　1. 取9ml無菌平皿一套在火焰旁按無菌操作法倒人15-20ml營養(yǎng)瓊脂，讓其冷凝成平板。

　　2.左手拿上述平板,右手拿接種環(huán)在火焰上滅菌后沾取原始分離物在平板上平行劃線三條。

　　3.將接種環(huán)在火焰上滅菌,左手平板轉(zhuǎn)動大約70度，用滅菌接種環(huán)通過第一次劃線的處所作二次劃線，亦劃三條。

　　同上法再作第三次,，第四次劃線。

　　蓋上平板蓋，將平板倒過來置28-30℃下培養(yǎng)2-4天后察看成果。劃的好應(yīng)在第四次劃線處呈現(xiàn)單個菌落。

　　注:本答案也可畫圖闡明。

　　4、如何檢討細(xì)菌的活動性?

　　檢討細(xì)菌的活動性有兩種方法:

　　鏡檢法

　　將待檢樣品制成菌懸液,滴一點(diǎn)菌液于一蓋玻片上，取一凹窩載玻片，將凹窩對準(zhǔn)菌懸液蓋在蓋玻片上，然后將蓋玻片和載玻片一起翻轉(zhuǎn)，讓菌懸液在凹窩上的蓋玻片下。然后在顯微鏡下察看，觀察應(yīng)找懸液的邊沿，因細(xì)菌為了更多地接觸空氣，總向水滴的邊沿運(yùn)動。視察時要注意將細(xì)菌的運(yùn)動與分子的布朗運(yùn)動差別開。

　　半固體穿刺法

　　將待檢細(xì)菌穿刺接種在半固體試管培養(yǎng)基中,若細(xì)菌僅沿穿刺線生長,解釋細(xì)菌不活動。若細(xì)菌沿穿刺線向四周擴(kuò)散生長,闡明細(xì)菌有運(yùn)動性。

　　5、簡述配制培養(yǎng)基的基本原則:

　　培養(yǎng)基是人工配制的供不同微生物生長滋生，或用于積聚代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)。所以配制培養(yǎng)基時應(yīng)注意以下原則：

　　1. 依據(jù)微生物的不同選用不同的培養(yǎng)基，以滿足微生物對營養(yǎng)物的須要。如自養(yǎng)型微生物所請求養(yǎng)分較簡略，而異養(yǎng)型微生物營養(yǎng)請求較龐雜。培養(yǎng)細(xì)菌，放線菌，真菌等各有不同的培養(yǎng)基。

　　2. 注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度與配比。微生物生長所須要的營養(yǎng)物質(zhì)往往在恰當(dāng)時才生長良好。濃度大往往會克制微生物的生長。如糖類，各種重金屬鹽類假如濃度太高，也會影響微生物的生長。同時各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度比也應(yīng)注意，特殊是C/N比。

　　3. 注意將培養(yǎng)基的pH值把持在必定范疇內(nèi)。為了防止因微生物生長滋生或積聚代謝產(chǎn)物后影響培養(yǎng)基pH值，常在其中加入磷酸鹽，碳酸鹽，以保持培養(yǎng)基pH值的相對恒定。

　　同時還應(yīng)斟酌培養(yǎng)基的氧化還原電位及原資料的經(jīng)濟(jì)、易購和起源普遍的原則。

　　6、試述配制培養(yǎng)基的根本進(jìn)程及應(yīng)當(dāng)注意的問題。

　　配制培養(yǎng)基的根本進(jìn)程是:

　　按培養(yǎng)基的配方稱取各種藥品，用量太少的藥品應(yīng)配制成溶液后再取必定量參加。

　　將各種藥品加水溶解，通常是加所需水量的一半。

　　若配固體培養(yǎng)基，按2%的用量稱取瓊脂，用水將瓊脂浸濕一下，用手?jǐn)D往瓊脂中過多的水分，加進(jìn)2的溶液中。

　　加熱至瓊脂全體溶解，并補(bǔ)足所需的全部水量。

　　用1molNaOH和1molHCL調(diào)節(jié)pH至請求值。

　　用分裝器將培養(yǎng)基分裝進(jìn)試管或三角瓶中，塞上棉塞并包扎，滅菌后備用。

　　注意事項:

　　配制進(jìn)程中，在加熱融化瓊脂時，要不斷攪拌，以防糊底。

　　分裝時不要讓培養(yǎng)基感染試管口或瓶口，以防培養(yǎng)過程中輕易污染雜菌。

　　7、試述顯微計數(shù)的基礎(chǔ)方式。

　　顯微計數(shù)通常用來測微生物單細(xì)胞的數(shù)量，大一點(diǎn)的細(xì)胞如酵母菌用血球計數(shù)板，小一點(diǎn)的細(xì)胞如細(xì)菌用細(xì)菌計數(shù)板。該測數(shù)方法不能差別死活細(xì)胞，測出的是微生物總的細(xì)胞數(shù)目。

　　血球計數(shù)板和細(xì)菌計數(shù)板結(jié)構(gòu)類似，計數(shù)區(qū)的面積都是1mm2，兩者的差異在于血球計數(shù)板的深度為0.1mm。細(xì)菌計數(shù)板的深度為0.02mm。無論是血球計數(shù)板還是細(xì)菌計數(shù)板計數(shù)區(qū)都劃為25個慷慨格，每個大方格又劃為16個小格。所以每小格的體積為1/4000mm3或1/20000mm3。

　　計數(shù)時,先在顯微鏡下找到計數(shù)區(qū)，然后將菌液稀釋到恰當(dāng)濃度，取少量菌液滴在計數(shù)區(qū)上蓋上特制蓋玻片，亦可先蓋蓋玻片。然后用吸管將菌液從計數(shù)板上的溝里加入?？烤旱谋砻鎻埩Τ涑庥嫈?shù)區(qū)。

　　計數(shù)時采用五點(diǎn)取樣法數(shù)數(shù)，即四角各取一個大方格，再在中心取一個慷慨格。計數(shù)時慷慨格四周壓線的細(xì)胞只數(shù)兩邊，以防增添數(shù)目。

　　將5個大方格的菌數(shù)加起來除以80得出每個小格的菌數(shù)，再乘以4000即為1mm3的菌數(shù)，再乘上1000即為1ml的菌數(shù)，乘上稀釋倍數(shù)即為樣品含菌數(shù)。

　　8、標(biāo)本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它?

　　要做到這一點(diǎn)，首先取決于顯微鏡的好壞，若顯微鏡上的推進(jìn)器帶有縱橫標(biāo)尺，很輕易做到這一點(diǎn)。首先記住標(biāo)本片放到推動器上的方向，然后記下視察某一物體時推動器上的縱橫標(biāo)尺的數(shù)字。如縱3，橫4。

　　當(dāng)標(biāo)本片拿下來后，若要反復(fù)察看本來的物象，只要按原方向?qū)?biāo)本片莢在推動器上，將推進(jìn)器推進(jìn)到第一次觀察該物體的縱，橫標(biāo)尺數(shù)字縱3，橫4，即可看到第一次視察過的物體。

　　9、試述在光學(xué)顯微鏡下所看到的Anabaenaazotica的重要特點(diǎn)。

　　Anabaenaazotica的重要特點(diǎn)是:

　　菌體為絲狀體，營養(yǎng)細(xì)胞為綠色，藻絲不扭曲。

　　該菌有異型胞,異型胞間生，無色透明，兩端有極點(diǎn)。

　　厚壁孢子無色、大、兩端無極點(diǎn)。

　　10革蘭氏染色反映的成敗要害是什么?為什么革蘭氏染色有十分主要的理論與實踐意義?

　　因通過革蘭氏染色，可把幾乎所有的細(xì)菌都分成G＋和G－菌兩大類細(xì)菌，在細(xì)胞構(gòu)造、成分、形態(tài)、生理、生化、遺傳、免疫、生態(tài)和藥物敏感性等方面都浮現(xiàn)出顯明的差別。因此，任何細(xì)菌只要通過革蘭氏染色，即可供給不少主要的生物學(xué)特征方面的信息。

　　革蘭氏染色反響的成敗要害是:

　　菌齡:12-24小時的純培養(yǎng)物。

　　革蘭氏染色操作時，要嚴(yán)厲把持酒精脫色時光，菌液涂布均勻而薄。

　　培養(yǎng)基的組成。

　　11、如何從土壤中分別得到一個微生物的純培養(yǎng)體?

　　首先要根據(jù)分離對象選擇合適的培養(yǎng)基。若要分離真菌應(yīng)選用馬丁-孟加拉紅選擇培養(yǎng)基；若要分離細(xì)菌應(yīng)選用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；若要分離放線菌應(yīng)選用高氏培養(yǎng)基。

　　土樣采回來后，用慣例的十倍稀釋分離法進(jìn)行稀釋分離，若分離細(xì)菌，一般稀至10-8,若分離放線菌,一般稀至10-6；若分離真菌，一般稀至10-4。取Zui后三個稀釋度倒平板獲得單個菌落。

　　將平板上呈現(xiàn)的單菌落轉(zhuǎn)接斜面培養(yǎng)，同時鏡檢菌體的純度，若不純，應(yīng)將培育的單菌落斜面再次進(jìn)行稀釋分別。倒平板獲得單菌落，轉(zhuǎn)接斜面培養(yǎng)，同時鏡檢菌體的純度。重復(fù)幾次直到得到菌體單一的單菌落方可以為是某一微生物的純造就體。

　　12、察氏培養(yǎng)基的組成為:蔗糖:30克,磷酸氫二鉀:1.0克,硝酸鈉:2克,硫酸鎂0.5克,氯化鉀:0.5克,硫酸亞鐵:0.01克,蒸餾水:1000ml.試述:

　　該培養(yǎng)基的C源,N源各是什么物資。

　　除C源和N源外的其它物質(zhì)起什么作用:

　　該培養(yǎng)基為什么不加生長因子?

　　該培養(yǎng)基的C源物質(zhì)是蔗糖，N源物質(zhì)是硝酸鈉。

　　1. 磷酸氫二鉀、硫酸鎂、氯化鉀、硫酸亞鐵為該培育基供給礦質(zhì)養(yǎng)分。蒸餾水供給水分。

　　2. 該培養(yǎng)基培養(yǎng)的微生物在培養(yǎng)基上能合成自身所需的全體生長因子，故無需添加生長因素,該培養(yǎng)基所培養(yǎng)的微生物為野生型。.


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