潘氏實(shí)驗(yàn)
簡(jiǎn)介
潘氏試驗(yàn)是指腦脊液中的蛋白測(cè)定,也稱球蛋白定性試驗(yàn),其原因是腦脊液在病變時(shí),蛋白有不同水平的增添,多為球蛋白增長(zhǎng),在潘氏試驗(yàn)中球蛋白遇酚而變性,涌現(xiàn)沉淀而成陽性。
潘氏試驗(yàn)
潘氏試劑的配制:在熱的200ml蒸餾水中加入10ml苯酚(石碳酸),強(qiáng)力混雜后,放置37攝氏度48小時(shí)。
應(yīng)用時(shí)放置室溫,汲取其上清液10ml于12*100mm的試管中,滴入一滴腦脊液,在黑色背景下觀察其是否有白色沉淀,而叛定陰陽性。
臨床意義
正常腦脊液含有極微量的蛋白質(zhì),其中以白蛋白為主,潘氏試驗(yàn)為陰性反響?;撔阅X膜炎,結(jié)核性腦膜炎及顱內(nèi)出血等,均見蛋白質(zhì)增添,且多為球蛋白增長(zhǎng),潘氏試驗(yàn)呈陽性反映。
第十章 腦脊液檢查
第二節(jié) 化學(xué)檢查
一、腦脊液潘氏試驗(yàn)意義 陽性見于各種腦膜炎、腦炎、腦出血、蛛網(wǎng)膜下腔阻塞和出血、多發(fā)性神經(jīng)炎、變形性脊椎病等。
二、腦脊液葡萄糖測(cè)定意義
1. 增卓識(shí)于:糖尿病、乙型腦炎、病毒性腦膜炎、脊髓灰質(zhì)炎、腦卒中、腦腫瘤等。
2. 下降見于:化膿性腦膜炎、結(jié)核性腦膜炎、真菌性腦膜炎、蛛網(wǎng)膜下腔出血、原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性腦膜腫瘤等。
三、腦脊液氯化物測(cè)定意義
1. 結(jié)核性腦膜炎、化膿性腦膜炎、真菌性腦膜炎、脊髓灰質(zhì)炎、中毒性腦炎、腦腫瘤等腦脊液中氯化物有不同水平減少。
2. 尿毒癥、腎炎、漿液性腦膜炎時(shí)可增添。 腦脊液白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)
化驗(yàn)先容:此檢討在某些疾病的辨別診斷上有主要意義。白細(xì)胞總數(shù)正常時(shí),一般不做白細(xì)胞分類。如超過正常數(shù)值,則需做白細(xì)胞分類。腦脊液中白細(xì)胞為中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞(包含單核細(xì)胞)三類。
臨床意義:
在白細(xì)胞超過正常值、對(duì)其進(jìn)行分類后,可有以下幾種情況。
?。?)中性粒細(xì)胞增多:常見于急性細(xì)菌性沾染或慢性感染急性發(fā)作時(shí)。還可見于脊髓灰質(zhì)炎早期結(jié)核性腦膜炎早期。
?。?)淋巴細(xì)胞增多:常見于結(jié)核性腦膜炎、化膿性腦膜炎經(jīng)過治療后,以及布氏桿菌
性腦膜炎、腦膿腫和腦膜鄰近感染、腦和腦膜的病毒性感染、霉菌感染、立克次體感染、螺旋體感染、疫苗接種后或感染后腦脊髓炎,也可見于寄生蟲沾染、脫髓鞘病、腦瘤、結(jié)節(jié)病和白塞氏綜合征等
參考值:0-8個(gè)/mm3
一、蛋白質(zhì)定性檢討(潘氏球蛋白定性試驗(yàn))
1、潘氏球蛋白定性試驗(yàn)原理 腦脊液中蛋白質(zhì)重要是球蛋白與苯酚聯(lián)合,可形成不溶性蛋白鹽而下沉,發(fā)生白色混濁或沉淀。
2、試劑
5%苯酚溶液:取純苯酚25ml,加蒸餾水至500 ml,用力振搖,放置37℃溫箱內(nèi)1~2天,待完整溶解后,置棕色瓶?jī)?nèi)保留。
飽和苯溶液:取苯酚10 ml,加蒸餾水至100 ml,充足混勻,置進(jìn)37℃溫箱中數(shù)小時(shí),見底層有酚析出,上層即為飽和酚溶液。避光保留,一般置棕色瓶?jī)?nèi)保留。
3、操作 取試劑2~3 ml,置于小試管中,用毛細(xì)滴管滴進(jìn)腦脊液1~2滴,在玄色背景下立即察看成果。
4、結(jié)果斷定
陰性(-):無混濁,清楚透明,不顯霧狀。
極弱陽性(±):微呈白霧狀,對(duì)光不易看到,在玄色背景下才干看到。
弱陽性(+):呈灰白色白霧狀。
陽性(++):呈白色薄云霧狀混濁。
強(qiáng)陽性(+++):呈白色絮狀沉淀或白色濃云塊狀。
Zui強(qiáng)陽性(++++):立即形成白色凝塊。
5、方法學(xué)評(píng)價(jià) 潘氏(Pandy)試驗(yàn)所需標(biāo)本量少,操作簡(jiǎn)略,結(jié)果觀察較為明白,臨床試驗(yàn)室常用此法。但該方法過于敏感,有一部分正凡人也可涌現(xiàn)極弱陽性(±)結(jié)果。
6、注意事項(xiàng)
?。?)紅細(xì)胞過多時(shí),須先離心使細(xì)胞沉淀,汲取上清液進(jìn)行試驗(yàn)。
?。?)試驗(yàn)中所用試管應(yīng)十分干凈,否則易呈現(xiàn)假陽性結(jié)果。
?。?)所用試劑苯酚如不純,亦可引起假陽性反映;室溫低于10℃,酚飽和度低,亦可引起假陽性成果。
7、正常參考值 正常腦脊液中蛋白質(zhì)含量?jī)H是血漿蛋白的1/200,即0.2~0.4g/L,其成分以白蛋白為主,故蛋白定性實(shí)驗(yàn)成果為陰性或極弱陽性(±)。
8、臨床意義 有腦組織和腦膜疾患時(shí)常呈陽性反響,如化膿性腦膜炎、結(jié)核性腦膜炎、梅毒性中樞神經(jīng)體系疾病、脊髓灰白質(zhì)炎、風(fēng)行性腦炎等。腦出血時(shí)多呈強(qiáng)陽性反映,如外傷性血液混入腦脊液中,亦可呈陽性反響。
李凡他試驗(yàn)
李凡他試驗(yàn)先容:
李凡他試驗(yàn)是作為差別滲出液和漏出液Zui重要,Zui常用的辦法之一。臨床上一般用于鑒別胸水及腹水是否炎癥的一項(xiàng)慣例檢查,陽性(+)表現(xiàn)積液為滲出液,陰性(-)表現(xiàn)積液為漏出液。
李凡他試驗(yàn)正常值:
暫無考證。
李凡他試驗(yàn)臨床意義:
異常結(jié)果:陽性和陰性分辨有不同的病癥,陽性時(shí)滲出液由炎癥引起,常見于感染性、非感染性因素,有時(shí)可見于惡性腫瘤。陰性是漏出液屬非炎癥性,基礎(chǔ)形成原由于:血漿膠體滲透壓下降,血管內(nèi)壓力增高,淋巴管阻塞等。
須要檢查的人群:存在漿膜腔積液的人群。
第八章 漿膜腔積液檢驗(yàn)
試驗(yàn)一 漿膜腔積液理學(xué)檢討
【目標(biāo)】 控制漿膜腔積液(serous cavity fluid)理學(xué)檢查的內(nèi)容和方式。
【原理】 因漏出液與滲出液的產(chǎn)活力制不同,故各種體液的色彩、透明度、凝固性等也有不同,可以通過肉眼和感觀的方式差別。
【器材】 比重計(jì)、比重筒。
【標(biāo)本】 漿膜腔穿刺液。
【操作】
1.觀察顏色 以肉眼觀察漿膜腔積液色彩變更。滲出液混濁,可呈深淺不同的黃色、紅色、乳白等顏色;漏出液多為淡黃色,稀薄透明,根據(jù)觀察到的顏色如實(shí)描寫報(bào)告。
2.觀察透明度 察看時(shí)可輕搖標(biāo)本,以肉眼觀察漿膜腔積液透明度的變更。漏出液清楚透明;滲出液可呈現(xiàn)不同濁度,如“微渾”、“渾濁”等,依據(jù)視察到的透明度如實(shí)描寫報(bào)告。
3.觀察凝固性 傾斜漿膜腔積液試管,肉眼視察有無凝塊形成,結(jié)果可根據(jù)標(biāo)本情形不同用“無凝塊”、“有凝塊”報(bào)告,滲出液常有凝塊,而漏出液一般無凝固性。
4.測(cè)定比密 充足混勻的漿膜腔積液遲緩倒入比重筒中,以能懸浮起比重計(jì)為宜。將比重計(jì)輕輕放進(jìn)裝有漿膜腔積液的筒中并加以捻轉(zhuǎn),待其靜置自由懸浮于漿膜腔積液中(勿使其接觸比重筒壁),讀取液體凹面相重合的比重計(jì)上的標(biāo)尺刻度數(shù)值并作記載。
【參考值】
1.外觀 漏出液為淺黃色清晰透明或微混;滲出液為黃色、黃綠色、紅色、咖啡色等不同的色彩,混濁。
2.比密 漏出液<1.015;滲出液>1.015。
【注意事項(xiàng)】
1.器材 堅(jiān)持比重計(jì)清潔、刻度精確,測(cè)定比密后,應(yīng)立即浸泡、清洗清潔,以免蛋白質(zhì)凝固在比重計(jì)上,影響正確性。如標(biāo)本量少,可采取折射儀測(cè)定比密。
2. 標(biāo)本 漿膜腔積液標(biāo)本一般分裝在2支試管內(nèi)送檢:一管作細(xì)胞學(xué)檢查,為避免標(biāo)本凝固引起細(xì)胞變性損壞而影響結(jié)果,應(yīng)加100mg/ml乙二胺四乙酸二鈉或二鉀抗凝,每 0.1ml可抗凝6ml標(biāo)本;另一管不加抗凝劑,用以察看有無凝固現(xiàn)象。
3.?dāng)喽ńY(jié)果
?。?)當(dāng)標(biāo)本顏色或透明度轉(zhuǎn)變不顯明或難以觀察時(shí),可在試管后以白色或黑色為背景,燈光下細(xì)心觀察。
?。?)標(biāo)本呈黃色一般為滲出液,多見炎癥性積液,呈云霧狀混濁樣,甚至呈膿性,凝固性高、比密增高;淺黃色透明的標(biāo)本一般為漏出液,清晰或微混、一般無凝固。
(3)當(dāng)標(biāo)本中含有大批的纖溶酶時(shí),可將纖維蛋白溶解,使?jié)B出液看不到凝塊,應(yīng)聯(lián)合其它試驗(yàn)剖析標(biāo)本情形。
4.妥當(dāng)處置殘余標(biāo)本 檢驗(yàn)完畢后余留的標(biāo)本和所用的器皿應(yīng)按《臨床試驗(yàn)室廢物處置原則》(S/T/49)的規(guī)定處置,以免造成污染。
實(shí)驗(yàn)二 漿膜腔積液顯微鏡檢查
【目標(biāo)】 控制漿膜腔積液顯微鏡檢查,包含有核細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類的內(nèi)容、方式。
【原理】 根據(jù)漿膜腔積液中的各種細(xì)胞形態(tài)特色,通過計(jì)算必定量體積的漿膜腔液體內(nèi)細(xì)胞數(shù)或者將標(biāo)本染色分類計(jì)數(shù),盤算出漿膜腔積液中各種細(xì)胞的數(shù)目或百分比。
【器材】
1.試管、試管架。
2.吸管、吸耳球。
3.微量吸管、膠吸頭、干脫脂棉。
4.玻棒。
5. 改進(jìn)Neubauer計(jì)數(shù)板、蓋玻片、綢布。
6.顯微鏡。
【試劑 】
1. 冰乙酸、白細(xì)胞稀釋液。
2. 瑞氏染液或瑞?吉染液。
【標(biāo)本】 漿膜腔穿刺液。
【操作】
?。ㄒ唬┯泻思?xì)胞計(jì)數(shù) 方法與腦脊液雷同,如細(xì)胞數(shù)較多的利用稀釋法進(jìn)行檢查。
1.直接計(jì)數(shù)法 實(shí)用于有核細(xì)胞數(shù)不高的清楚透明或微渾的漿膜腔液。
?。?)往除紅細(xì)胞:在小試管內(nèi)放入冰乙酸1~2滴,轉(zhuǎn)動(dòng)試管,使內(nèi)壁黏附少許冰乙酸后傾往。滴加混勻漿膜腔液3~4滴,混勻,放置數(shù)分鐘損壞紅細(xì)胞。
(2)充池:用微量吸管吸取漿膜腔液(混勻破壞紅細(xì)胞后)充入2個(gè)計(jì)數(shù)池。
?。?)計(jì)數(shù):靜置2~3min后,低倍鏡計(jì)數(shù)2個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)四角和中心大方格共10個(gè)慷慨格內(nèi)的有核細(xì)胞數(shù)。
(4)盤算:10個(gè)慷慨格內(nèi)有核細(xì)胞總數(shù)即每微升漿膜腔液的有核細(xì)胞數(shù),再換算成每升漿膜腔液的有核細(xì)胞數(shù)。
2.稀釋計(jì)數(shù)法 實(shí)用于渾濁的漿膜腔積液。
?。?)稀釋并損壞紅細(xì)胞:根據(jù)標(biāo)本內(nèi)有核細(xì)胞多少情形。用白細(xì)胞稀釋液對(duì)標(biāo)本進(jìn)行?定倍數(shù)稀釋混勻,放置數(shù)分鐘,破壞紅細(xì)胞。
?。?)充池:用微量吸管汲取漿膜腔液(混勻稀釋后)充入1個(gè)計(jì)數(shù)池。
?。?)計(jì)數(shù):靜置2~3min后,低倍鏡計(jì)數(shù)1個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)的四角和中心大方格共5個(gè)大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)。
?。?)計(jì)算:依據(jù)5個(gè)慷慨格內(nèi)的有核細(xì)胞總數(shù)和稀釋倍數(shù)盤算每升漿膜腔積液的有核細(xì)胞數(shù)。
?。ǘ┯泻思?xì)胞分類
1.直接分類法 有核細(xì)胞計(jì)數(shù)后以低倍鏡改變?yōu)楦弑剁R,直接在高倍鏡下根據(jù)細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞核形態(tài)進(jìn)行分類,共分類計(jì)數(shù)l00個(gè)有核細(xì)胞,分辨計(jì)數(shù)單個(gè)核細(xì)胞(包括淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及間皮細(xì)胞)和多個(gè)核細(xì)胞(粒細(xì)胞)的百分率。若白細(xì)胞數(shù)不足l00個(gè),則直接寫出單個(gè)核細(xì)胞和多個(gè)核細(xì)胞具體數(shù)。
2.涂片染色分類法 在抽出穿刺液后立即以1 000r/min離心5min,取沉淀物制成均勻的薄片,置于室溫下或37℃恒溫箱內(nèi)敏捷干燥,瑞氏或瑞?吉染色后油鏡分類計(jì)數(shù)100個(gè)有核細(xì)胞。一般標(biāo)本中可見淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等。作腫瘤細(xì)胞檢查時(shí)利用巴氏或HE染色檢查。
【注意事項(xiàng)】
1.細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類計(jì)數(shù)
?。?)必要時(shí)可采取細(xì)胞玻片離心沉淀儀收集細(xì)胞,以進(jìn)步白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的正確性。
?。?)作細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查及分類的涂片一般不少于5張,以備查找腫瘤細(xì)胞,必要時(shí)同時(shí)制備厚片,涂片干燥前可用乙醚乙二醇等量混雜,固定30min。
(3)有核細(xì)胞計(jì)數(shù)及染色分類計(jì)數(shù),應(yīng)包含粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和間皮細(xì)胞。分類進(jìn)程中若發(fā)明間皮細(xì)胞和不能分類的異常細(xì)胞應(yīng)另外描寫,并作HE、巴氏染色查找腫瘤細(xì)胞。
2.方法選擇
(1)有核細(xì)胞分類計(jì)數(shù)誤差大,尤其是陳腐性、細(xì)胞變形的標(biāo)本,故推舉采用涂片染色分類法計(jì)數(shù)。
(2)血細(xì)胞分析儀實(shí)用于血性積液的檢測(cè).其他積液可采取流式原理的尿液剖析儀檢測(cè)
3.結(jié)果剖析 常用于漏出液與滲出液的辨別。漏出液中有核細(xì)胞常<300×106/L,滲出液常>500×106/L。見表8-1。
表8-1 漿膜腔積液特色及可能原因
漿膜腔積液特色
可能原因
以多形核白細(xì)胞為主
化膿性炎癥或早期結(jié)核性積液
嗜酸性粒細(xì)胞增多
結(jié)核性滲出液
淋巴細(xì)胞增多
提醒慢性炎癥。如結(jié)核性滲出液、病毒沾染、SLE的多發(fā)性漿膜炎
以間皮細(xì)胞及組織細(xì)胞增多為主
提醒漿膜上皮脫落茂盛,如淤血、惡性腫瘤等
心包積液有核細(xì)胞>1 000×106/L
提示心包炎
腹水有核細(xì)胞>500×106/L,中性粒細(xì)胞>50%
提醒細(xì)菌性腹膜炎
癌細(xì)胞
診斷惡性腫瘤
試驗(yàn)三 漿膜腔積液粘蛋白定性試驗(yàn)
【目標(biāo)】 控制漿膜腔液粘蛋白定性(rivalta test , 李凡他試驗(yàn))的辦法。
【原理】 漿膜腔液漏出液中,只有微量的粘蛋白,李凡他實(shí)驗(yàn)為陰性。當(dāng)炎癥時(shí)漿腹腔上皮細(xì)胞被刺激,分泌粘蛋白增多。粘蛋白是一種酸性糖蛋白,等電點(diǎn)pH為3~5,因此,可在稀乙酸中呈現(xiàn)白色沉淀。
【器材】
1. 100m1量筒。
2. 滴管、膠吸頭。
【試劑】
1. 冰乙酸。
2. 蒸餾水。
【標(biāo)本】 漿膜腔穿刺液。
【操作】
1.加試劑 在100m1量筒加入2~3滴冰乙酸,再加l00ml蒸餾水,充分混勻(pH3~5),靜置數(shù)分鐘,偏光顯微鏡報(bào)價(jià)。
2.加標(biāo)本 將漿膜腔積液靠近量筒液面垂直逐滴輕輕滴下。
3.觀察結(jié)果 立即在黑色背景下觀察有無白色云霧狀沉淀天生及其降落程度。
4.判定結(jié)果 見表8-2。
表8-2 漿膜腔液粘蛋白定性結(jié)果判定
結(jié)果
斷定根據(jù)
陰性
清晰不顯霧狀
陽性
(土)
漸呈白霧狀
(+)
參加標(biāo)本即涌現(xiàn)白霧狀
(++)
白薄云狀
(+++)
白濃云狀
5. 報(bào)告方法 陰性或陽性(陽性水平根據(jù)表8-2報(bào)告)。
【注意事項(xiàng)】
1.標(biāo)本 血性漿膜腔積液經(jīng)離心沉淀后,用上清液進(jìn)行檢查。
2.器材與試劑
(1)量筒的高度與蒸餾水的量要足夠。
(2)依據(jù)漏出液重要成分制備基本液,在其中參加不同量的粘蛋白作為陽性對(duì)比。
(3)在量筒中參加冰乙酸及蒸餾水后應(yīng)充足混勻,否則會(huì)發(fā)生假陰性。
3.pH 保證pH3~5的酸堿度,加冰乙酸不宜過多,以免pH闊別漿膜粘蛋白的等電點(diǎn)發(fā)生假陰性。
4.結(jié)果判定
?。?)加入標(biāo)本后立即在玄色背景下細(xì)心視察結(jié)果。如渾濁顯明,下沉遲緩,中途消散者為陰性。
?。?)標(biāo)本中球蛋白含量增高時(shí)試驗(yàn)可呈假陽性,必要時(shí)可進(jìn)行辨別試驗(yàn),辦法是先將標(biāo)本滴入未加冰乙酸的蒸餾水中觀察,如有白色云霧狀沉淀,此乃球蛋白不溶于水所致。
5.結(jié)果分析 常用于漏出液與滲出液的鑒別。漏出液常陰性,滲出液常陽性。
6.本試驗(yàn)是一種初步的簡(jiǎn)易篩檢試驗(yàn),對(duì)區(qū)分滲出液與漏出液特異性意義不高。
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