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      光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)及其使用

      http://www.hkxccw.cn 來源:原創(chuàng) 日期:2010-12-6 15:49:18
        一、顯微鏡的光學(xué)體系

        顯微鏡的光學(xué)體系重要包含物鏡、目鏡、反光鏡和聚光器四個(gè)部件。廣義的說也包含照明光源、濾光器、蓋玻片和載玻片等。

       ?。ㄒ唬┪镧R

        物鏡是決議顯微鏡性能的Zui主要部件,安裝在物鏡轉(zhuǎn)換器上,接近被視察的物體,故叫做物鏡或接物鏡。

        1.物鏡的分類

        物鏡依據(jù)使用條件的不同可分為干燥物鏡和浸液物鏡;其中浸液物鏡又可分為水浸物鏡和油浸物鏡(常用放大倍數(shù)為90—100倍)。

        依據(jù)放大倍數(shù)的不同可分為 低倍物鏡(10倍以下)、中倍物鏡(20倍左右)高倍物鏡(40—65倍)。

        依據(jù)像差改正情形,分為消色差物鏡(常用,能改正光譜中兩種色光的色差的物鏡)和復(fù)色差物鏡(能改正光譜中三種色光的色差的物鏡,價(jià)錢貴,使用少)。

        2.物鏡的主要參數(shù):

        物鏡主要參數(shù)包含:放大倍數(shù)、數(shù)值孔徑和工作距離。

       ?、俜糯蟊稊?shù)是指眼睛看到像的大小與對應(yīng)標(biāo)本大小的比值。它指的是長度的比值而不是面積的比值。例:放大倍數(shù)為100×,指的是長度是1μm的標(biāo)本,放大后像的長度是100μm,要是以面積盤算,則放大了10,000倍。

        顯微鏡的總放大倍數(shù)即是物鏡和目鏡放大倍數(shù)的乘積。

       ?、跀?shù)值孔徑也叫鏡口率,簡寫NA 或A,是物鏡和聚光器的重要參數(shù),與顯微鏡的辨別力成正比。干燥物鏡的數(shù)值孔徑為0.05-0.95,油浸物鏡(香柏油)的數(shù)值孔徑為1.25。

       ?、酃ぷ骶嚯x是指當(dāng)所觀察的標(biāo)本Zui明白時(shí)物鏡的前端透鏡下面到標(biāo)本的蓋玻片上面的距離。物鏡的工作距離與物鏡的焦距有關(guān),物鏡的焦距越長,放大倍數(shù)越低,其工作間隔越長。例:10倍物鏡上標(biāo)有10/0.25和160/0.17,其中10為物鏡的放大倍數(shù);0.25為數(shù)值孔徑;160為鏡筒長度(單位mm);0.17為蓋玻片的尺度厚度(單位 mm)。10倍物鏡有效工作距離為6.5mm,40倍物鏡有效工作距離為0.48mm 。

        3.物鏡的作用是將標(biāo)本作第一次放大,它是決議顯微鏡性能的Zui主要的部件——分辨力的高下。

        分辨力也叫分辨率或分辯本事。分辨力的大小是用分辨距離(所能分辨開的兩個(gè)物點(diǎn)間的Zui小距離)的數(shù)值來表現(xiàn)的。在明視距離(25cm)之處,正凡人眼所能看清相距0.073mm的兩個(gè)物點(diǎn),這個(gè)0.073mm的數(shù)值,即為正凡人眼的分辨距離。顯微鏡的分辨距離越小,即表現(xiàn)它的分辨力越高,也就是表示它的性能越好。

        顯微鏡的分辨力的大小由物鏡的分辨力來決定的,而物鏡的分辨力又是由它的數(shù)值孔徑和照明光線的波長決定的。

        當(dāng)用普通的中心照明法(使光線均勻地透過標(biāo)本的明視照明法)時(shí),顯微鏡的分辨距離為d=0.61λ/NA

        式中d——物鏡的分辨距離,單位 nm。

        λ——照明光線波長,單位 nm。

        NA ——物鏡的數(shù)值孔徑

        例如油浸物鏡的數(shù)值孔徑為1.25,可見光波長規(guī)模為400—700nm ,取其均勻波長550 nm,則d=270 nm,約即是照明光線波長一半。一般地,用可見光照明的顯微鏡分辯力的極限是0.2μm。

       ?。ǘ┠跨R

        由于它靠近觀察者的眼睛,因此也叫接目鏡。安裝在鏡筒的上端。

        1.目鏡的構(gòu)造

        通常目鏡由高低兩組透鏡組成,上面的透鏡叫做接目透鏡,下面的透鏡叫做會(huì)聚透鏡或場鏡。高低透鏡之間或場鏡下面裝有一個(gè)光闌(它的大小決議了視場的大小),由于標(biāo)本正好在光闌面上成像,可在這個(gè)光闌上粘一小段毛發(fā)作為指針,用來唆使某個(gè)特色的目的。也可在其上面放置目鏡測微尺,用來丈量所視察標(biāo)本的大小。

        目鏡的長度越短,放大倍數(shù)越大(因目鏡的放大倍數(shù)與目鏡的焦距成反比)。

        2.目鏡的作用

        是將已被物鏡放大的,辨別清楚的實(shí)像進(jìn)一步放大,到達(dá)人眼能輕易分辯明白的水平。

        常用目鏡的放大倍數(shù)為5—16倍。

        3.目鏡與物鏡的關(guān)系

        物鏡已經(jīng)分辨清晰的細(xì)微構(gòu)造,假如沒有經(jīng)過目鏡的再放大,達(dá)不到人眼所能分辨的大小,那就看不清晰;但物鏡所不能分辨的細(xì)微構(gòu)造,固然經(jīng)過高倍目鏡的再放大,也還是看不明白,所以目鏡只能起放大作用,不會(huì)進(jìn)步顯微鏡的分辨率。有時(shí)固然物鏡能分辨開兩個(gè)靠得很近的物點(diǎn),但由于這兩個(gè)物點(diǎn)的像的距離小于眼睛的分辨距離,還是無法看清。所以,目鏡和物鏡即相互接洽,又彼此制約。

       ?。ㄈ┚酃馄?

        聚光器也叫集光器。位于標(biāo)本下方的聚光器支架上。它主要由聚光鏡和可變光闌組成。其中,聚光鏡可分為明視場聚光鏡(普通顯微鏡配置)和暗視場聚光鏡。

        1.光鏡的主要參數(shù)

        數(shù)值孔徑(N&#8226;A )是聚光鏡的主要參數(shù),Zui大數(shù)值孔徑一般是1.2—1.4,數(shù)值孔徑有必定的可變規(guī)模,通??淘谏戏酵哥R邊框上的數(shù)字是代表Zui大的數(shù)值孔徑,通過調(diào)節(jié)下部可變光闌的開放水平,可得到此數(shù)字以下的各種不同的數(shù)值孔徑,以適應(yīng)不同物鏡的須要。有的聚光鏡由幾組透鏡組成,Zui上面的一組透鏡可以卸掉或移出光路,使聚光鏡的數(shù)值孔徑變小,以適應(yīng)低倍物鏡觀察時(shí)的照明。

        2.聚光鏡的作用

        聚光鏡的作用相當(dāng)于凸透鏡,起會(huì)聚光線的作用,以加強(qiáng)標(biāo)本的照明。一般地把聚光鏡的聚光焦點(diǎn)設(shè)計(jì)在它上端透鏡平面上方約1.25mm處。(聚光焦點(diǎn)正在所要觀察的標(biāo)本上,載玻片的厚度為1.1mm左右)

        3.可變光闌

        可變光闌也叫光圈,位于聚光鏡的下方,由十幾張金屬薄片組成,中心部分形成圓孔。其作用是調(diào)節(jié)光強(qiáng)度和使聚光鏡的數(shù)值孔徑與物鏡的數(shù)值孔徑相適應(yīng)。可變光闌開得越大,數(shù)值孔徑越大(觀察完畢后,應(yīng)將光圈調(diào)至Zui大)。

        在可變光闌下面,還有一個(gè)圓形的濾光片托架。

       ?。ㄋ模┓垂忡R

        反光鏡是一個(gè)可以隨便轉(zhuǎn)動(dòng)的雙面鏡,直徑為50mm,一面為平面,一面為凹面,其作用是將從任何方向射來的光線經(jīng)通光孔反射上來。平面鏡反射光線的才能較弱,是在光線較強(qiáng)時(shí)應(yīng)用,凹面鏡反射光線的才能較強(qiáng),是在光線較弱時(shí)使用。

        反光鏡通常一面是平面鏡,另一面是凹面鏡,裝在聚光器下面,可以在程度與垂直兩個(gè)方向上任意旋轉(zhuǎn)。

        反光鏡的作用是使由光源發(fā)出的光線或自然光射向聚光器。當(dāng)用聚光器時(shí)一般用平面鏡,不用時(shí)用凹面鏡;當(dāng)光線強(qiáng)時(shí)用平面鏡,弱時(shí)用凹面鏡。

        察看完畢后,應(yīng)將反光鏡垂直放置。

       ?。ㄎ澹┱彰鞴庠?

        顯微鏡的照明可以用自然光源或人工光源

        1.自然光源

        光線來自天空,Zui好是由白云反射來的。不可應(yīng)用直接照來的太陽光。

        2.人工光源

       ?、賹θ斯す庠吹幕A(chǔ)請求:有足夠的發(fā)光強(qiáng)度;光源發(fā)熱不能過多。

       ?、诔S玫娜斯す庠矗猴@微鏡燈;日光燈

        (六)濾光器

        安裝在光源和聚光器之間。作用是讓所選擇的某一波段的光線通過,而接收掉其他的光線,即為了轉(zhuǎn)變光線的光譜成分或減弱光的強(qiáng)度。分為兩大類:濾光片和液體濾光器。

       ?。ㄆ撸┥w玻片和載玻片

        蓋玻片和載玻片的表面應(yīng)相當(dāng)平坦,無氣泡,無劃痕。Zui好選用無色,透明度好的,應(yīng)用前應(yīng)洗凈。

        蓋玻片的標(biāo)準(zhǔn)厚度是0.17±0.02mm,如不用蓋玻片或蓋玻片厚度不適合,都回影響成像質(zhì)量。

        載玻片的尺度厚度是1.1±0.04mm,一般可用范疇是1—1.2mm,若太厚會(huì)影響聚光器效能,太薄則輕易決裂。

        二、顯微鏡的機(jī)械裝置

        顯微鏡的機(jī)械裝置是顯微鏡的主要組成部分。其作用是固定與調(diào)節(jié)光學(xué)鏡頭,固定與移動(dòng)標(biāo)本等。重要有鏡座、鏡臂、載物臺(tái)、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、與調(diào)焦裝置組成。

       ?。ㄒ唬╃R座和鏡臂

        1.鏡座 作用是支持全部顯微鏡,裝有反光鏡,有的還裝有照明光源。

        2.鏡臂 作用是支持鏡筒和載物臺(tái)。分固定、可傾斜兩種。

        (二)載物臺(tái)(又稱工作臺(tái)、鏡臺(tái))

        載物臺(tái)作用是安置載玻片,外形有圓形和方形兩種,其中方形的面積為120mm×110mm。中心有一個(gè)通光孔,通光孔后方左右兩側(cè)各有一個(gè)安裝壓片夾用的小孔。分為固定式與移動(dòng)式兩種。有的載物臺(tái)的縱橫坐標(biāo)上都裝有游標(biāo)尺,一般讀數(shù)為0.1mm,游標(biāo)尺可用來測定標(biāo)本的大小,也可用來對被檢部分做標(biāo)志。

       ?。ㄈ╃R筒

        鏡筒上端放置目鏡,下端銜接物鏡轉(zhuǎn)換器。分為固定式和可調(diào)節(jié)式兩種。機(jī)械筒長(從目鏡管上緣到物鏡轉(zhuǎn)換器螺旋口下真?zhèn)€間隔稱為鏡筒長度或機(jī)械筒長)不能變革的叫做固定式鏡筒,能變革的叫做調(diào)節(jié)式鏡筒,新式顯微鏡大多采取固定式鏡筒,國產(chǎn)顯微鏡也大多采取固定式鏡筒,國產(chǎn)顯微鏡的機(jī)械筒長通常是160mm。

        安裝目鏡的鏡筒,有單筒和雙筒兩種。單筒又可分為豎立式和傾斜式兩種,雙筒則都是傾斜式的。其中雙筒顯微鏡,兩眼可同時(shí)觀察以減輕眼睛的疲勞。雙筒之間的間隔可以調(diào)節(jié),而且其中有一個(gè)目鏡有屈光度調(diào)節(jié)(即視力調(diào)節(jié))裝置,便于兩眼視力不同的觀察者使用。(四)、物鏡轉(zhuǎn)換器

        物鏡轉(zhuǎn)換器固定在鏡筒下端,有3—4個(gè)物鏡螺旋口,物鏡應(yīng)按放大倍數(shù)高下次序排列。旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器時(shí),利用手指捏住旋轉(zhuǎn)碟旋轉(zhuǎn),不要用手指推進(jìn)物鏡,因時(shí)光長輕易使光軸歪斜,使成像質(zhì)量邊壞。

       ?。ㄎ澹┱{(diào)焦裝置

        顯微鏡上裝有粗準(zhǔn)焦螺旋和細(xì)準(zhǔn)焦螺旋。有的顯微鏡粗準(zhǔn)焦螺旋與裝在同一軸上,大螺旋為粗準(zhǔn)焦螺旋,小螺旋為細(xì)準(zhǔn)焦螺旋;有的則離開安頓,位于鏡臂的上端較大的一對螺旋為是粗準(zhǔn)焦螺旋,其轉(zhuǎn)動(dòng)一周,鏡筒上升或降落10mm。 位于粗準(zhǔn)焦螺旋下方較小的一對螺旋為細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,其轉(zhuǎn)動(dòng)一周,鏡筒升降值為0.1mm,細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)焦范圍不小于1.8mm。

        三、顯微鏡及其部件的使用

        1.使用單筒顯微鏡時(shí),電子顯微鏡,要養(yǎng)成用左眼觀察的習(xí)慣(因一般用右手畫圖),觀察時(shí)要兩眼同時(shí)睜開,不要睜一只閉一只,由于這樣易于疲勞。為了練習(xí)學(xué)生習(xí)慣于兩眼同時(shí)睜開觀察,可剪一塊長約14cm,寬約6cm的長方形硬紙片,在靠近左端處挖一個(gè)直徑比鏡筒上端外徑略小的圓孔,把圓孔套在鏡筒上段,觀察時(shí)兩眼同時(shí)睜開,應(yīng)用紙片的右端擋住右眼的視線,這樣練習(xí)一段時(shí)光后,就能習(xí)慣于兩眼同時(shí)睜開,然后把紙片往掉。

        2.直筒顯微鏡的鏡臂與鏡座銜接處,是一個(gè)機(jī)械關(guān)節(jié),可用于調(diào)節(jié)鏡筒的傾斜度,便于觀察,鏡臂不能過于后傾,一般不超過40°。但是在使用臨時(shí)裝片觀察時(shí),制止使用傾斜關(guān)節(jié)(當(dāng)鏡筒傾斜時(shí),載物臺(tái)也隨之傾斜,載玻片上的液體易流出),尤其是裝片內(nèi)含酸性試劑時(shí)嚴(yán)禁使用,以免污損鏡體。

        3.目鏡和物鏡的使用

        一般都是用一個(gè)放大倍數(shù)適中的目鏡(10×)和Zui低倍的物鏡開端觀察,逐步改用倍數(shù)較高的物鏡,從中找到符合試驗(yàn)請求的放大倍數(shù)。

        轉(zhuǎn)換物鏡時(shí),先用低倍鏡觀察,調(diào)節(jié)到準(zhǔn)確的工作距離(成像Zui清楚)。假如進(jìn)一步使用高倍物鏡觀察,應(yīng)在轉(zhuǎn)換高倍物鏡之前,把物像中須要放大觀察的部分移至視野中心(將低倍物鏡轉(zhuǎn)換成高倍物鏡觀察時(shí),視野中的物像規(guī)??s小了很多)。低倍物鏡和高倍物鏡基礎(chǔ)齊焦(同高調(diào)焦),在用低倍物鏡觀察清楚時(shí),換高倍物鏡應(yīng)可以見到物像,但物像不必定很清晰,可以轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋進(jìn)行調(diào)節(jié)。

        通常以為,應(yīng)用任何一個(gè)物鏡時(shí),有效放大倍數(shù)的上限是1,000乘它的數(shù)值孔徑,下限是250乘它的數(shù)值孔徑。如40×物鏡的數(shù)值孔徑是0.65,則上、下限分辨為:1000×0.65=650倍和250×0.65≈163倍,超過有效放大倍數(shù)上限的叫做無效放大,不能進(jìn)步視察后果。低于下限的放大倍數(shù)則人眼無法辨別,不利于察看。一般Zui適用的放大倍數(shù)范疇是500—700乘數(shù)值孔徑之間的數(shù)字。

        4.油浸物鏡的使用

        使用油浸物鏡時(shí),一般不要使用同高調(diào)焦。同高調(diào)焦只實(shí)用于每臺(tái)顯微鏡的原配物鏡,在使用低倍和高倍物鏡時(shí),是一個(gè)極有利的便利條件,但在使用油浸物鏡時(shí),則受到必定限制,一般地說,用油鏡觀察未加蓋玻片的標(biāo)本片(載玻片)時(shí),應(yīng)用同高調(diào)焦的安全度較大,而對于有蓋玻片的標(biāo)本片,要警惕使用,因?yàn)橛徒镧R的工作距離很短,在設(shè)計(jì)和裝配時(shí)所斟酌的同高是對標(biāo)準(zhǔn)厚度蓋玻片的。

        用油浸物鏡時(shí),只在標(biāo)本片上滴香柏油。觀察完畢后,要及時(shí)進(jìn)行干凈工作,如不及時(shí)進(jìn)行,香柏油粘上灰塵,擦拭時(shí)灰塵粒子可能磨損透鏡,香柏油在空氣中裸露時(shí)光長,還會(huì)變稠、變干,擦拭很艱苦,對儀器很不利。擦拭要仔細(xì),動(dòng)作要輕。油浸物鏡前端先用干的擦鏡紙擦一兩次,把大部分油往掉,再用二甲苯滴濕的擦鏡紙擦兩次,Zui后再用干的擦鏡紙擦一次。標(biāo)本片上的香柏油可用“拉紙法”(即把一小張擦鏡紙蓋在香柏油上,然后在紙上滴一些二甲苯,趁濕把紙往外拉,這樣持續(xù)三四次,即可清潔,一般不會(huì)破壞未加蓋玻片的涂片標(biāo)本)擦凈。擦鏡紙也要防塵,一般在使用前,將每頁剪成8小塊,貯存在一個(gè)清潔的小培育皿中,用起來既節(jié)儉又便利。

        5.聚光器的使用方式

        ①使用聚光器的原因

        當(dāng)放大倍數(shù)增添時(shí),一方面由于放大倍數(shù)越高,透鏡數(shù)目越多,被透鏡接收的光線也越多;另一方面由于視場(指的是所能看到被檢標(biāo)本的范疇)的亮度與放大倍數(shù)的平方成反比,即放大倍數(shù)越高,視場越暗。為了得到足夠的亮度,必需安裝聚光器,把光線集中到所要察看的標(biāo)本上。

       ?、谟^察時(shí)聚光器應(yīng)處的高度

        觀察時(shí),要保證得到Zui好的觀察后果,聚光器的聚光焦點(diǎn)應(yīng)正好落在標(biāo)本上。要實(shí)現(xiàn)這個(gè)條件,就必需調(diào)節(jié)聚光器的高度。當(dāng)用平行光照明時(shí),聚光器的聚光焦點(diǎn)是在它上端透鏡平面中心上方約1.25mm之處,因此,人們經(jīng)常請求在觀察時(shí)將聚光器上升到它上端透鏡平面僅稍稍低于載物臺(tái)平面的高度,這樣聚光焦點(diǎn)就可能落到位于標(biāo)準(zhǔn)厚度載玻片上的標(biāo)本上。當(dāng)使用比尺度厚度薄的載玻片來承放標(biāo)本時(shí),聚光器的地位要相應(yīng)地下降一些,而當(dāng)使用過厚地載玻片時(shí),聚光焦點(diǎn)只能落在標(biāo)本下方,不利于精致的觀察。

       ?、劬酃馄髋c物鏡的配合

        這里所謂的配合,就是使聚光器和物鏡這兩者的數(shù)值孔徑取得一致,以更好的進(jìn)行較為精致的觀察。假如聚光器的數(shù)值孔徑低于物鏡,那物鏡的部分?jǐn)?shù)值孔徑就揮霍了,從而達(dá)不到它的Zui高分辨力。假如把聚光器的數(shù)值孔徑大于物鏡的數(shù)值孔徑,則一方面不能進(jìn)步物鏡的規(guī)定分辨力,另一方面反會(huì)由于照明光束過寬,使物象的清晰度降落。聚光器與物鏡配合的操作方式是:在完成照明、調(diào)焦操作后,取下目鏡直接向鏡筒中看,把聚光器下的可變光闌關(guān)到Zui小,再慢慢地開大。開到它的口徑與所見視場的直徑恰好一樣大,然后按上目鏡,即可進(jìn)行觀察。每轉(zhuǎn)換一次物鏡,都要隨著進(jìn)行依次這樣的配合操作。有的聚光器可變光闌的邊框上刻有表現(xiàn)開啟口徑的標(biāo)準(zhǔn),可以根據(jù)刻度來進(jìn)行配合。

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