顯微鏡,顯微鏡價(jià)格,顯微鏡的價(jià)格

　　 藥物晶型的分析辦法先容審評(píng)五部審評(píng)十室 李志萬(wàn)

　　周藝光搜集

　　物資在結(jié)晶時(shí)由于受各種因素影響，使分子內(nèi)或分子間鍵合方法產(chǎn)生轉(zhuǎn)變，致使分子或原子在晶格空間排列不同，形成不同的晶體結(jié)構(gòu)。同一物質(zhì)具有兩種或兩種以上的空間排列和晶胞參數(shù)，形成多種晶型的現(xiàn)象稱(chēng)為多晶現(xiàn)象(polymorphism)。固然在必定的溫度和壓力下，只有一種晶型在熱力學(xué)上是穩(wěn)固的，但由于從亞穩(wěn)態(tài)改變?yōu)榉€(wěn)態(tài)的進(jìn)程通常非常遲緩，因此很多結(jié)晶藥物都存在多晶現(xiàn)象。固體多晶型包含構(gòu)象型多晶型、構(gòu)型型多晶型、色多晶型和假多晶型。

　　同一藥物的不同晶型在外觀、溶解度、熔點(diǎn)、溶出度、生物有效性等方面可能會(huì)有明顯不同，從而影響了藥物的穩(wěn)固性、生物應(yīng)用度及療效,該種現(xiàn)象在口服固體制劑方面表示得尤為顯明。藥物多晶型現(xiàn)象是影響藥品德量與臨床療效的主要因素之一，因此對(duì)存在多晶型的藥物進(jìn)行研發(fā)以及審評(píng)時(shí)，應(yīng)對(duì)其晶型分析予以特殊的關(guān)注。目前辨別晶型重要是針對(duì)不同的晶型具有不同的理化特征及光譜學(xué)特點(diǎn)來(lái)進(jìn)行的，現(xiàn)將幾種常用且特點(diǎn)性強(qiáng)、區(qū)分度高的辦法先容如下，以供參考。

　　1 X-射線衍射法（X-ray diffraction）

　　X-射線衍射是研究藥物晶型的主要手段，該方法可用于差別晶態(tài)和非晶態(tài)，辨別晶體的品種，差別混雜物和化合物，測(cè)定藥物晶型結(jié)構(gòu)，測(cè)定晶胞參數(shù)（如原子間的間隔、環(huán)平面的間隔、雙面夾角等），還可用于不同晶型的比擬。X-射線衍射法又分為粉末衍射和單晶衍射兩種，前者主要用于結(jié)晶物質(zhì)的辨別及純度檢討，后者主要用于分子量和晶體結(jié)構(gòu)的測(cè)定。

　　1.1 粉末衍射 粉末衍射是研究藥物多晶型的Zui常用的方法。粉末法研究的對(duì)象不是單晶體，而是眾多取向隨機(jī)的小晶體的總和。每一種晶體的粉末X-射線衍射圖譜就如同人的指紋，應(yīng)用該方法所測(cè)得的每一種晶體的衍射線強(qiáng)度和散布都有著特別的規(guī)律，以此利用所測(cè)得的圖譜，可獲得出晶型變化、結(jié)晶度、晶構(gòu)狀況、是否有混晶等信息。該方法不必制備單晶，使得試驗(yàn)過(guò)程更為簡(jiǎn)便，但在利用該方法時(shí)，應(yīng)注意粉末的細(xì)度，而且在制備樣品時(shí)需特殊注意研磨過(guò)篩時(shí)不可產(chǎn)生晶型的改變。

　　1.2 單晶衍射 單晶衍射是國(guó)際上公認(rèn)的確證多晶型的Zui可靠辦法，應(yīng)用該方式可獲得對(duì)晶體的各晶胞參數(shù)，進(jìn)而斷定結(jié)晶構(gòu)型和分子排列，到達(dá)對(duì)晶型的深度認(rèn)知。而且該方法還可用于結(jié)晶水/溶劑的測(cè)定，以及對(duì)成鹽藥物堿基、酸根間成鍵關(guān)系的確認(rèn)。然而，由于較難得到足夠大小和純度的單晶，因此該方法在實(shí)際操作中存在必定艱苦。

　　2 紅外接收光譜法

　　不同晶型藥物分子中的某些化學(xué)鍵鍵長(zhǎng)、鍵角會(huì)有所不同，致使其振動(dòng)-轉(zhuǎn)動(dòng)躍遷能級(jí)不同，與其相應(yīng)的紅外光譜的某些重要特點(diǎn)如接收帶頻率、峰形、峰位、峰強(qiáng)度等也會(huì)呈現(xiàn)差別，因此紅外光譜可用于藥物多晶型研討。目前已知的由于晶型不同引起紅外光譜不同的藥物有甲苯咪唑等20多個(gè)品種。

　　紅外光譜法常用的樣品制備方式有KBr壓片法、石蠟糊法、漫反射法以及衰減全反射法（attenuated total reflection, ATR）等。斟酌到研磨可能會(huì)導(dǎo)致藥物晶型的轉(zhuǎn)變，所以在用紅外光譜法進(jìn)行藥物晶型測(cè)定時(shí)多采取石蠟油糊法，或采取擴(kuò)散反射紅外傅里葉變化光譜法（DRIFT）。近些年來(lái)，隨著盤(pán)算機(jī)及剖析軟件的發(fā)展，近紅外傅里葉變換拉曼光譜法（NIR-FTRS）也利用在藥物多晶型的定性、定量研討中，它融會(huì)了NIR速度快、不損壞樣品，不需試劑、可透過(guò)玻璃或石英在線測(cè)定的上風(fēng)STM和拉曼光譜不需專(zhuān)門(mén)制備樣品以及對(duì)固體藥物晶型變更敏銳的特色，可視為傳統(tǒng)紅外光譜法研究藥物多晶型的一種延長(zhǎng)。

　　紅外光譜法較為簡(jiǎn)便、快速，然而對(duì)于部分晶型不同而紅外圖譜雷同或差異不大的藥物，紅外光譜就難以區(qū)分了，如苯乙阿托品的晶型I和晶型II的紅外光譜一致；而且有時(shí)圖譜的差異也可能是由于樣品純度不夠，晶體的大小，研磨過(guò)程的轉(zhuǎn)晶等導(dǎo)致的分析成果偏差。這時(shí)就須要同時(shí)采用其他方法共同肯定樣品的晶型。

　　3 熔點(diǎn)法和熱臺(tái)顯微鏡法

　　如上所述，藥物晶型不同，熔點(diǎn)可能會(huì)有差異，除常見(jiàn)的毛細(xì)管法和熔點(diǎn)測(cè)定儀方法外，熱臺(tái)顯微鏡也是過(guò)熔點(diǎn)研究藥物多晶型存在的常見(jiàn)方法之一，該方法能直接察看晶體的相變、融化、分解、重結(jié)晶等熱力學(xué)動(dòng)態(tài)過(guò)程，因此利用該工具照藥典規(guī)定進(jìn)行熔點(diǎn)測(cè)定可初步判定藥物是否存在多晶現(xiàn)象。

　　部分藥物多晶型之間熔點(diǎn)相差幅度較小，甚至無(wú)差異，故以熔點(diǎn)差異肯定多晶型，只是初步檢測(cè)方法之一。一般來(lái)說(shuō)，晶型穩(wěn)定性越高熔點(diǎn)也越高；兩種晶型的熔點(diǎn)差距大小，可以相對(duì)地估量出它之間的穩(wěn)定性關(guān)系。假如兩種晶型熔點(diǎn)相差不到1℃時(shí)，則這兩種晶型在結(jié)晶過(guò)程中就可以同時(shí)析出，且兩者的相對(duì)穩(wěn)定性較難判別。兩者熔點(diǎn)越接近，不穩(wěn)定的晶型越不易得到。

　　4 熱分析法

　　不同晶型，升溫或冷卻進(jìn)程中的吸、放熱也會(huì)有差別。熱分析法就是在程序控溫下，丈量物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)與溫度的關(guān)系，并通過(guò)測(cè)得的熱分析曲線來(lái)斷定藥物晶型的異同。熱分析法主要包含差示掃描量熱法、差熱分析法和熱重分析法。

　　4.1 DZ3335差示掃描量熱法（differential scanning calorimeter, DSC） DSC是在程序把持下，通過(guò)不斷加熱或降溫，丈量樣品與惰性參比物（常用α-Al2O3）之間的能量差隨溫度變化的一種技術(shù)。DSC多用于分析樣品的熔融分解情形以及是否有轉(zhuǎn)晶或混晶現(xiàn)象。

　　4.2 DZ3320A差熱分析法（differential thermal analysis, DTA） DTA和DSC較為類(lèi)似，所不同的是，DTA是通過(guò)同步丈量樣品與惰性參比物的溫度差來(lái)判定物資的內(nèi)在變更。各種物質(zhì)都有自己的差熱曲線，因此DTA是物質(zhì)物理特征分析的一種主要手腕。

　　4.3 熱重剖析法（thermogravimetric analysis, TGA） TGA是在程序把持下，測(cè)定物資的質(zhì)量隨溫度變更的一種技巧，實(shí)用于檢討晶體中溶劑的損失或樣品升華、分解的進(jìn)程，可推測(cè)晶體中含結(jié)晶水或結(jié)晶溶劑的情形，從而可快速區(qū)分無(wú)水晶型與假多晶型。

　　熱分析法所需樣品量少，方法簡(jiǎn)便，敏銳度高，重現(xiàn)性好，在藥物多晶型分析中較為常用。

　　5 偏光顯微鏡法

　　偏光顯微鏡除了含有一般光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造外，Zui主要的特色是裝有兩個(gè)偏光零件，即裝在載物臺(tái)下方的起偏鏡(又稱(chēng)下偏光鏡)和裝在鏡筒中的剖析鏡(又稱(chēng)上偏光鏡)。兩鏡均由人工合成偏光片組成，通過(guò)角度的調(diào)劑，可將射進(jìn)光源轉(zhuǎn)換成正交偏光。正由于如此，該方式重要實(shí)用于透明固體藥物。

　　透明固體藥物的觀測(cè)一般是在正交偏光下進(jìn)行。由于晶體構(gòu)造不同和偏光射進(jìn)時(shí)的雙折射作用，在偏光顯微鏡上、下偏光鏡的正交作用下，晶體樣品置于載物臺(tái)上旋轉(zhuǎn)360o時(shí)，則晶體顯侄淘蕕囊?Ш蛻亮粒??逡??本?逵肫?衿髡穸?ο蛩?傻慕喚淺莆??飩牽?ü?煌?南?飩牽?純刪齠??逅?艫木??。

　　偏光顯微鏡法還可研究晶型間的相變，可以正確測(cè)定晶體熔點(diǎn)；對(duì)于具有各項(xiàng)向異性的動(dòng)植物資料(如纖維蛋白、淀粉粒)的結(jié)構(gòu)，具有特別的鑒定作用。

　　6 核磁共振法

　　不同晶型結(jié)構(gòu)中分子中的原子所處化學(xué)環(huán)境存在細(xì)微差異，相似核對(duì)施加的外磁場(chǎng)即發(fā)生不同的響應(yīng)，致使相似核在不同化學(xué)位移處產(chǎn)生共振，因此其13C—NMR譜圖不同，通過(guò)對(duì)不同晶型圖譜的對(duì)照，即可斷定藥物是否存在多晶現(xiàn)象，通過(guò)與已知晶型的13C—NMR比擬，也可獲得測(cè)試樣品的具體晶型。尤其是近年來(lái)呈現(xiàn)的固態(tài)13C—NMR、高效質(zhì)子往耦合、交叉極化(CP)、幻角自旋(CAS)等新技術(shù)的運(yùn)用，使得我們能獲得高分辯率的13C—NMR譜，這種譜圖能給出有關(guān)動(dòng)力學(xué)和局部化學(xué)環(huán)境的具體原子程度的信息，因此利這種高辨別率的13C—NMR譜圖可進(jìn)行多晶型的混晶分析以及某種特征晶型的測(cè)定。

　　7 掃描隧道顯微鏡法

　　掃描隧道顯微鏡可使人類(lèi)能夠直接察看到晶體表面上的單個(gè)原子及其排列狀況，并能夠研究其相應(yīng)的物理和化學(xué)特征；可以直接觀測(cè)晶體的晶格和原子構(gòu)造、晶面分子原子排列、晶面缺點(diǎn)等。因此掃描隧道顯微鏡用于藥物多晶型研討非常有利，具有遼闊的利用遠(yuǎn)景。

　　8 溶解度方法

　　如前所敘，藥物的不同晶型的自由能不同，導(dǎo)致了其溶解度不同，一般說(shuō)來(lái)，自由能越大，晶型越不穩(wěn)固，溶解度越大；反之則小。在實(shí)踐中常測(cè)定各晶型再不同溫度下的溶解度，并繪制出溶解度（Cs）-溫度（T）曲線。通過(guò)測(cè)定Cs-T曲線，可以區(qū)分出不同的晶型，如有相交的曲線，還可得到其熱力學(xué)改變溫度（Tp）

　　9 藥物多晶型盤(pán)算機(jī)幫助猜測(cè)

　　近年來(lái)，隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展，盤(pán)算機(jī)幫助猜測(cè)藥物晶型也有了較大進(jìn)展。例如，在固體藥物結(jié)構(gòu)已知的條件下，應(yīng)用貿(mào)易程序Polymorph Predictor, 通過(guò)計(jì)算點(diǎn)陣能量Zui小化方法尋找能量上可能的晶體結(jié)構(gòu)和分子排列規(guī)律，并將它們按能量大小排列，計(jì)算出不同干凈條件下的Zui可能天生的晶型。但該方法在藥物中的勝利率目前還較低。

　　10 其 他

　　除上述常見(jiàn)的的幾種方法外，還可依據(jù)不同晶型藥物因分子或原子在晶格空間排列不同所導(dǎo)致在密度、折射率、吉布斯自由能等方面的差別，通過(guò)測(cè)定藥物的密度、折光率或采取磁性異向儀和膨脹計(jì)等儀器進(jìn)行不同晶型的斷定；對(duì)于存在色多晶型藥物，還可通過(guò)察看藥物的色彩，推測(cè)藥物動(dòng)物晶型。另外隨著科學(xué)技巧的提高，隨著對(duì)化學(xué)物質(zhì)細(xì)微結(jié)構(gòu)認(rèn)識(shí)的加深，信任還會(huì)有新的技巧手腕可用于藥物晶型的研究。

　　11 結(jié) 語(yǔ)

　　上述所提及的藥物晶型斷定方法多數(shù)僅能反應(yīng)藥物不同晶型某一方面的物理性質(zhì)，因此，不同測(cè)試手腕的綜合應(yīng)用，可到達(dá)對(duì)藥物晶型的全面認(rèn)識(shí)。近年來(lái)呈現(xiàn)的紅外與熱顯微鏡法，以及差示掃描量熱法與熱臺(tái)顯微鏡法聯(lián)用方法即是該思路的一種體現(xiàn)。


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