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　　南隱士編著

　　第一節(jié) 產(chǎn)業(yè)發(fā)酵染菌的危害

　　發(fā)酵工業(yè)自從采取純種培養(yǎng)以后，產(chǎn)率有很大進步，然而，防止染菌的請求也更高了。人們在與雜菌污染的奮斗中，積聚、總結(jié)了很多可貴的經(jīng)驗。為了防止染菌，應(yīng)用了一系列的設(shè)備、工藝和管理措施。例如：密閉式發(fā)酵罐，無菌空氣制備，設(shè)備、管道和無菌室的設(shè)計，培養(yǎng)基和設(shè)備滅菌，培養(yǎng)過程及其他方面的無菌操作等，大大下降了染菌率。但是至今一些現(xiàn)代發(fā)酵產(chǎn)業(yè)還遭遇染菌的嚴重要挾，甚至由于染菌而造成宏大的經(jīng)濟喪失。

　　據(jù)報道, 國外抗生素發(fā)酵染菌率為2％～5％，國內(nèi)的抗生素發(fā)酵、青霉素發(fā)酵染菌率2％，鏈霉素、紅霉素和四環(huán)素發(fā)酵染菌率約為5％，谷氨酸發(fā)酵噬菌體沾染率1～2％。染菌還是發(fā)酵產(chǎn)業(yè)的致命傷。輕者影響產(chǎn)率、產(chǎn)物提取收得率和產(chǎn)品德量；嚴重者造成“倒罐”，揮霍大批原資料，造成嚴重經(jīng)濟喪失，而且搗亂生產(chǎn)秩序，損壞生產(chǎn)打算。碰到持續(xù)染菌，特殊是又找不到染菌原因，未有防治辦法時，往往會影響人們的情感和生產(chǎn)積極性，造成無法估計的迫害。

　　染菌對發(fā)酵產(chǎn)率、提取收得率、產(chǎn)品德量和三廢治理等都有很大影響。然而，生產(chǎn)不同品種，污染不同種類和性質(zhì)的雜菌，不同的污染時間，不同的污染道路、污染水平，不同培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，所發(fā)生成果是不同的。

　　1、染菌對不同品種發(fā)酵的影響

　　由于各種發(fā)酵的菌種、培養(yǎng)基、發(fā)酵條件、發(fā)酵周期以及產(chǎn)物性質(zhì)等不同，受污染的迫害水平也不同。

　　青霉素發(fā)酵，由于很多雜菌都能發(fā)生青霉素酶，當(dāng)青霉素發(fā)酵無論是在前期、中期或后期沾染都能發(fā)生青霉素酶的雜菌，都能使青霉素敏捷損壞，使發(fā)酵一無所獲。

　　疫苗深層培養(yǎng)，一旦受污染，無論污染的是活菌、逝世菌或內(nèi)外毒素，都應(yīng)全體放棄。

　　檸檬酸發(fā)酵，在產(chǎn)酸后，pH值很低，一般雜菌不易生長，檸檬酸重要防止前期染菌。

　　谷氨酸發(fā)酵周期短，生產(chǎn)菌繁殖快，培養(yǎng)基不太豐碩，一般較少污染雜菌，但噬菌體污染對谷氨酸發(fā)酵的要挾非常大。

　　肌苷、肌苷酸發(fā)酵，由于生產(chǎn)菌是多種營養(yǎng)缺點型，生長才能差，培養(yǎng)基營養(yǎng)豐盛等，容易受雜菌污染，且雜菌污染后，營養(yǎng)成分迅速被消費，嚴重抑制生產(chǎn)菌生長和代謝產(chǎn)物的生成。

　　然而，無論哪種發(fā)酵，染菌后都由于糖等基質(zhì)被耗費，影響發(fā)酵產(chǎn)物的天生，使產(chǎn)量大為下降。

　　2、感染不同種類和性質(zhì)的雜菌對發(fā)酵的影響

　　抗生素發(fā)酵中，青霉素發(fā)酵污染細短產(chǎn)氣桿菌比污染粗大桿菌傷害更大，鏈霉素發(fā)酵污染細短桿菌、假單孢桿菌和產(chǎn)氣桿菌比污染粗大桿菌更危害，四環(huán)素發(fā)酵Zui怕污染雙球菌、芽孢桿菌和莢膜桿菌。

　　檸檬酸發(fā)酵Zui怕污染青霉菌。肌苷、肌苷酸發(fā)酵Zui怕污染芽孢桿菌。谷氨酸發(fā)酵Zui危險的是污染噬菌體，由于噬菌體蔓延迅速，難以防治，容易造成連續(xù)污染。

　　3、不同污染時光對發(fā)酵的影響

　?。?）種子培養(yǎng)期染菌

　　（2）發(fā)酵前期染菌

　?。?）發(fā)酵中期染菌

　?。?）發(fā)酵后期染菌

　　(1)種子培養(yǎng)期染菌

　　種子培養(yǎng)重要是生長滋生菌體，菌體濃度低，培養(yǎng)基營養(yǎng)豐盛，比擬輕易染菌。種子培養(yǎng)期染菌，帶進發(fā)酵罐中傷害極大，應(yīng)嚴厲把持種子污染。當(dāng)發(fā)明種子受污染均應(yīng)滅菌后棄往，并對種子罐、管道進行檢討和徹底滅菌。

　　(2)發(fā)酵前期染菌

　　發(fā)酵前期主要是菌體生長滋生，代謝產(chǎn)物天生很少，這個時代輕易染菌，污染后雜菌敏捷繁殖，與生產(chǎn)菌爭取營養(yǎng)成分和氧分，嚴重干擾生產(chǎn)菌的生長繁殖和產(chǎn)物的天生，要特殊防止發(fā)酵前期染菌。當(dāng)發(fā)酵前期染菌時，由于營養(yǎng)成分消費未幾，應(yīng)迅速重新滅菌，彌補必要的營養(yǎng)成分(如果體積太大，可放出部分受污染發(fā)酵液）重新接種進行發(fā)酵。

　　(3)發(fā)酵中期染菌

　　發(fā)酵中期染菌將嚴重干擾生產(chǎn)菌的代謝，影響產(chǎn)物的生成。有的雜菌繁殖后產(chǎn)生酸性物資，pH值降落，糖、氮消費迅速，菌(絲)體自溶，發(fā)酵液發(fā)粘，產(chǎn)生大批泡沫，代謝產(chǎn)物的積聚迅速減少或結(jié)束，有的已生成的產(chǎn)物也會被應(yīng)用破壞，有的發(fā)酵液發(fā)臭。

　　由于發(fā)酵中期染菌，養(yǎng)分成分大批耗費，一般搶救處理艱苦，迫害性很大。所以，發(fā)酵中期染菌應(yīng)努力做到早發(fā)明，快處置。處置方式應(yīng)依據(jù)各種發(fā)酵的特色和具體情形來決議。

　　如：抗生素發(fā)酵，可將另一罐發(fā)酵正常、單位高的發(fā)酵液的一部分輸入染菌罐中，以抑制雜菌繁殖，同時采用低透風(fēng)，少流加糖；檸檬酸發(fā)酵中期染菌，可根據(jù)所染雜菌的性質(zhì)分辨處理，如污染細菌，可加大透風(fēng)量，加速產(chǎn)酸，下降pH值，以抑制細菌生長，必要時可參加鹽酸調(diào)節(jié)pH3.0以下，抑制雜菌；如污染酵母，可參加O.025～O.035 g／L硫酸銅，抑制酵母生長，并進步風(fēng)量，加速產(chǎn)酸；如污染黃曲霉，可加入另一罐將近發(fā)酵成熟的醪液，使pH值降低,使黃曲霉自溶；但污染青霉則危害很大，由于青霉在pH值很低下能夠生長，如果殘?zhí)禽^低，可以提高風(fēng)量，促使產(chǎn)酸和耗糖，提前放罐。

　　(4)發(fā)酵后期染菌

　　發(fā)酵后期產(chǎn)物積聚較多，糖等養(yǎng)分物資接近耗盡。假如染菌量不太多，可持續(xù)進行發(fā)酵；如污染嚴重，損壞性較大，可以采用辦法提前放罐。

　　發(fā)酵后期染菌對不同產(chǎn)物的影響不同，如抗生素、檸檬酸發(fā)酵后期染菌影響不大，而肌苷、肌苷酸和谷氨酸、賴氨酸等發(fā)酵后期染菌會影響產(chǎn)物的產(chǎn)量、產(chǎn)物提取和產(chǎn)品質(zhì)量。

　　在染菌嚴重時，有人主意加入不影響生產(chǎn)菌正常代謝的某些抗生素、呋喃魯西林、對苯二酚、新潔爾滅等滅菌劑、克制雜菌生長。例如：慶大霉素發(fā)酵染菌，可參加少量慶大霉素粉或?qū)Ρ蕉幔换尹S霉素發(fā)酵染菌時，可加進新霉素。但是，在發(fā)酵開端時都加入殺菌劑以防止染菌，似無必要，也增添本錢，若當(dāng)發(fā)酵染菌后再加入殺菌劑又為時已晚，實際后果值得探討。

　　4、染菌水平對發(fā)酵的影響

　　染菌程度愈太，即進入發(fā)酵罐的雜菌數(shù)目多，對發(fā)酵的危害愈大。當(dāng)生產(chǎn)菌已迅速繁殖，在發(fā)酵液中占領(lǐng)上風(fēng)，污染極少數(shù)雜菌，如每1L中有1～2個雜菌，對發(fā)酵不會帶來影響，由于這些雜菌須要時間繁殖才干達到危害發(fā)酵的程度，而且環(huán)境對雜菌的繁殖已不利。當(dāng)75m3發(fā)酵液污染1個雜菌，要達到大幅度(106個／mL)污染時需要的時間(h)為：

　　條件 污染10000000個／mL 污染100000000個／mL

　　增代時光tg=30 min 23 26

　　延遲6h tg=30min 29 32

　　增代時光tg=2h 92 10000000

　　延遲6h tg=2h 98 11*11

　　但是污染幅度較大時，特別是發(fā)酵前期和中期污染，將造成嚴重的傷害。

　　5、染菌對產(chǎn)物提取和產(chǎn)品德量的影響

　　對于絲狀菌發(fā)酵被污染后，有大量菌絲自溶，發(fā)酵液發(fā)粘，有的甚至發(fā)臭。發(fā)酵液過濾困難，發(fā)酵前期染菌過濾更艱苦，嚴重影響產(chǎn)物提取收率和產(chǎn)品質(zhì)量。在這種情形下可先將發(fā)酵液加熱處理，再加助濾劑或者先加絮凝劑，使蛋白質(zhì)凝集，有利于過濾。

　　染菌的發(fā)酵液含有較多蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)：（1）如果采用沉淀法提取產(chǎn)物，那么，這些雜質(zhì)隨產(chǎn)物沉淀而影響下工序處理，影響產(chǎn)品質(zhì)量。如谷氨酸發(fā)酵染菌后，在等電點呈現(xiàn)β-型結(jié)晶，使谷氨酸無法分別，β-結(jié)晶谷氨酸含有大量發(fā)酵液，影響下工序精制處理，影響產(chǎn)品質(zhì)量。（2）如果采用溶媒萃取的提取工藝，由于蛋白質(zhì)等雜質(zhì)多，極易發(fā)生乳化，很難使水相和溶劑相分別，也影響進一步提純。（3）如果采用離子交流法提取工藝，由于發(fā)酵液發(fā)粘，大量菌體等膠體物資粘附在樹脂表面或被樹脂吸附，使樹脂吸附才能大大降低，有的難被水洗掉，在洗脫時與產(chǎn)物一起被洗脫，混在產(chǎn)物中，影響產(chǎn)物的提純。

　　此外，發(fā)酵染菌也造成三廢處理艱苦和對環(huán)境的污染。

　　第二節(jié) 染菌的檢查、原因分析和防止措施

　　1、染菌的檢討與斷定

　　在發(fā)酵進程中，對雜菌污染的及早發(fā)明、及時處置，是免除染菌造成嚴重喪失的主要辦法。因此，請求有確實、敏捷的方式來檢出雜菌的污染，目前常用辦法重要有以下幾種。

　　（1）顯微鏡檢查

　?。?）平板劃線培養(yǎng)或斜面培養(yǎng)檢查法

　?。?）肉湯培養(yǎng)檢查法

　　（4）異?，F(xiàn)象斷定法

　?。╨）顯微鏡檢查

　　通常用革蘭氏染色法，染色后在高倍顯微鏡下察看。對于霉菌、酵母發(fā)酵，先用低倍鏡視察生產(chǎn)菌的特點，然后再用高倍鏡察看有否雜菌存在。依據(jù)生產(chǎn)菌與雜菌的特點差別，判定是否染菌。必要時，可進行芽孢染色和鞭毛染色。

　?。?）平板劃線培養(yǎng)或斜面造就檢討法

　　先將經(jīng)滅菌的固體培養(yǎng)基倒入滅菌的平板中置培養(yǎng)箱37℃，保溫12h ，檢查無菌即可使用。將須要檢查的樣品在無菌平板上劃線，分辨置3℃、27℃培養(yǎng)，以適應(yīng)嗜中平和低溫菌的生長，一般在8 h后即可視察。 噬菌體檢查可采用雙層平板培養(yǎng)法，底層同為肉汁瓊脂培養(yǎng)基，上層減少瓊脂用量。先將滅菌的底層培養(yǎng)基熔后倒平板，凝固后，將上層培養(yǎng)基熔解并堅持40℃，加生產(chǎn)菌作為唆使菌和待檢樣品混雜后迅速倒在底層平板上，置培養(yǎng)箱保溫培養(yǎng)，經(jīng)12-20 h培養(yǎng)，視察有無噬菌斑。

　　培養(yǎng)基(pH 7．O)

　　葡萄糖(%) 牛肉膏(％) 蛋白胨(％) NaCI(％) 瓊脂(％)

　　上層 O.5 l.O 1.O O.5 1.0

　　下層 O.5 1.O 1.O O.5 2.O

　　(3)肉湯培養(yǎng)檢查法

　　將需檢查樣品接入經(jīng)滅菌并經(jīng)過檢查無菌的肉湯培養(yǎng)基中，放置37℃和27℃．分辨培養(yǎng)24h，進行察看，并取樣鏡檢。此法常用于檢查培養(yǎng)基和無菌空氣是否帶菌，也可用于噬菌體檢查，此時應(yīng)用生產(chǎn)菌作為唆使菌。

　　葡萄糖酚紅肉湯培養(yǎng)基：牛肉膏0.3％，葡萄糖0.5％，氯化鈉0.5％，蛋白胨0.8％，1 %酚紅溶液0.4％，pH 7.2。

　　無菌實驗僅取樣幾毫升，平板劃線培養(yǎng)取樣更少，當(dāng)發(fā)酵罐污染菌量未幾。 例如，每1 ml發(fā)酵液污染1個雜菌時被發(fā)現(xiàn)(一般檢出染菌時已超過這數(shù)目)，如果發(fā)酵液為35m3，即污染的總菌數(shù)為35|×106個。假定發(fā)酵開端時污染1個菌，繁殖至35×106個需要的時間如下。

　　設(shè)雜菌生長世代時間為1／2 h，生長速率常數(shù)μ為：

　　則從1個菌滋生至35×l0000000個所需的時間：

　　盤算成果表明，35m3發(fā)酵液從污染1個菌至35×10000000個菌需要12.5 h。也就是污染1個菌到能被檢出需要12.5 h。因此，用以上的檢查方法檢查未發(fā)現(xiàn)污染，還不能確定未被污染。

　　除以上辦法外，還可以從發(fā)酵過程的異常現(xiàn)象來判定是否染菌，如溶解氧、 pH值、排氣中CO2含量和菌體酶活氣等變化來判定。

　?。?）發(fā)酵過程中的異?，F(xiàn)象判定法

　?。ˋ） 溶解氧程度異常變化顯示染菌

　?。˙） 排氣中C02異常變更顯示染菌

　　(A)溶解氧水平異常變化顯示染菌 好氣性發(fā)酵均須要不斷供氧，特定的發(fā)酵具有一定的溶解氧水平，而且在不同發(fā)酵階段其溶解程度不同。圖6一l為谷氨酸異常發(fā)酵和異常發(fā)酵的溶解氧水平曲線。在發(fā)酵初期，菌體處于適應(yīng)期，耗氧量很少，溶解氧基礎(chǔ)不變；當(dāng)菌體進入對數(shù)生長期，耗氧量增添,溶解氧濃度很快降低，并且保持在一定水平(5％飽和度以上)，這階段由于操作條件（pH、溫度、加料等）變化。溶解氧有波動，但變化不大;發(fā)酵后期，菌體朽邁，耗氧量減少，溶解氧濃度又上升。當(dāng)感染噬菌體時，生產(chǎn)菌的呼吸作用受克制，溶解氧濃發(fā)很快上升，如圖中虛線所示。從圖中可見感染噬菌體時，溶解氧的變化比菌體濃度變化更敏銳，能更快地預(yù)感受感染。污染雜菌時，由于所感染雜菌的好氧性不同而異，當(dāng)污染好氣性雜菌，溶解氧在較短時間降落，并且接近零值，且長時間不能回升；當(dāng)污染的是非好氣性菌，而生產(chǎn)菌又由于受污染而克制生長，使耗氧量減少，溶解氧升高。

　　(B)排氣中C02異常變更顯示染菌

　　好氣性發(fā)酵排氣中CO2含量與糖代謝有關(guān)，可以根據(jù)。CO2含量來把持發(fā)酵工藝（如流加糖、透風(fēng)量等）。對于某種發(fā)酵，在工藝必定時，排氣中C02含量變化是有規(guī)律的。在染菌后，糖的耗費產(chǎn)生變更(加快或減慢)，引起CO2含量的異常變化。如污染雜菌，糖耗加快，C02含量增添；沾染噬菌體，糖耗減慢，CO2含量減少。因此，可依據(jù)CO2變化來斷定染菌。

　　2、發(fā)酵染菌率和染菌原因剖析

　?。?）發(fā)酵染菌率

　　發(fā)酵的總?cè)揪适侵敢荒陜?nèi)發(fā)酵染菌的批數(shù)與總投料發(fā)酵批數(shù)之比，

　　總?cè)揪?=（發(fā)酵染菌批數(shù)/總投料批數(shù)）×100％

　　發(fā)酵染菌率是在發(fā)酵罐中產(chǎn)生的染菌率，包含染菌后被搶救不了導(dǎo)致倒罐的批數(shù)，但種子罐培育的染菌不接進發(fā)酵罐，不導(dǎo)致發(fā)酵染菌的另行盤算。

　　由于各種發(fā)酵的菌種、培育基、產(chǎn)品性質(zhì)、發(fā)酵周期、生產(chǎn)環(huán)境條件、裝備和治理技巧程度等不同，染菌率有很大差異。如抗生素發(fā)酵周期長，養(yǎng)分比擬豐盛，染菌率較高。

　　據(jù)報道美國抗生素發(fā)酵，50年代染菌率為5％，隨著技術(shù)水平提高，染菌率降低但現(xiàn)仍然有2％。1979年瑞典Asfra公司報道，世界抗生素發(fā)酵染菌率為1％～10％，大多數(shù)公司染菌率為2％～5％。國內(nèi)青霉素發(fā)酵染菌率低乎2%，鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素發(fā)酵染菌率均高于5％。國內(nèi)谷氨酸發(fā)酵主要感染噬菌體，70年代有的廠家感染率高達10％，近年來由乎管理技術(shù)水平提高，已降低于2％以下。

　?。?）染菌原因分析

　　在發(fā)酵染菌之后，必需剖析染菌原因，總結(jié)發(fā)酵染茵的經(jīng)驗教訓(xùn)，把發(fā)酵染菌消滅在產(chǎn)生之前，防患于未然，是積極制服發(fā)酵染菌的Zui主要措施。假如對染菌不作具體分析。不懂得原因，而盲目地采用“措施”，只會勞民傷財，毫無后果。

　　造成發(fā)酵染菌的原因很多，但總結(jié)回納起來，其主要原因有：

　　（A） 種子帶菌；

　?。˙） 無菌空氣帶菌；

　?。–） 設(shè)備滲漏；

　?。―） 滅菌不徹底；

　?。‥） 操作失誤和技巧管理不善。

　　表6.1為日本抗生素發(fā)酵1965年染菌原因分析，表6.2為國內(nèi)抗生素廠發(fā)酵染菌原因分析。在發(fā)生染菌后，根據(jù)無菌實驗成果，參考以下方法進行分析，找出原因，杜盡污染。

　　表6?1 日本抗生素發(fā)酵染菌原因分析(1965年前)

　　染菌原因 百分率(％) 染菌原因 百分率(％) 種子帶菌或猜忌種子帶菌

　　接種時罐壓跌零

　　培養(yǎng)基滅菌不徹底

　　空氣系統(tǒng)有菌

　　夾套穿孔

　　攪拌填料漏

　　泡沫冒頂 9.64 0.19 O.79 19.96 12.36 2.09 O.48 閥門滲漏

　　蛇管穿孔

　　罐蓋漏

　　接種管穿孔

　　其它設(shè)備漏

　　操作同題

　　原因不明 1.45 5.89 1.54 O.39 10.13 10.15 24.91 表6-2上海第三制藥1961年3～10月染菌原因剖析 染菌原因 百分率(％) 染菌原因 百分率（%) 種子帶菌 14.15

　　蛇管穿孔

　　閥門滲漏 23.3

　　空氣體系有菌 10.0 14.20 治理不善 25.08

　　其它

　　原因不明 7.49 5.00 (a)染菌時間

　　發(fā)酵早期染菌，可能原因有：種子帶菌，培育基或裝備滅菌不徹底，接種操作不當(dāng)，無菌空氣帶菌等；

　　發(fā)酵后期染菌，可能原因有：中間補料污染，設(shè)備滲漏,操作問題。

　　(b)污染的雜菌種類

　　污染耐熱的芽孢桿菌，可能是培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹底；污染球菌、無芽孢桿菌等不耐熱雜菌，可能是種子帶菌、設(shè)備滲漏、操作問題等；污染淺綠色菌落的雜菌，可能是起源于水，即冷卻盤管摻漏;污染霉菌一般是無菌室滅菌不徹底或操作問題。

　　(c)染菌的幅度

　　如果各個發(fā)酵罐或多數(shù)發(fā)酵罐染菌。而且所污染的是同一種雜菌，一般是空氣體系問題；假如個別罐持續(xù)染菌，一般是設(shè)備問題。

　　以上僅僅是在分析問題時作為斟酌問題的入門，應(yīng)根據(jù)具體情形綜合分析，且通過進一步的無菌檢查來驗證。

　　3、雜菌污染道路及預(yù)防

　?。?） 種子帶菌及防止

　?。?） 無菌空氣帶菌及防止

　?。?） 培養(yǎng)基和設(shè)備滅菌不徹底導(dǎo)致染菌及防止

　　(1)種子帶菌及防止

　　種子帶菌的原因主要有以下幾方面。

　　(a)培養(yǎng)基及用具滅菌不徹底菌種培養(yǎng)基及用具滅菌均在殺菌鍋中進行，造成滅菌不徹底主要是滅菌時鍋內(nèi)空氣排放不完整，造成假壓，使滅菌時溫度達不到要求。

　　(b)菌種在移接進程中受污染菌種的移接工作是在無菌室中，按無菌操作進行。當(dāng)菌種移接操作不當(dāng)，或無菌室管理不嚴，就可能引起污染。因此，要嚴格無菌室管理制度和嚴厲按無菌操作接種，公道設(shè)計無菌室。

　　(c)菌種在培養(yǎng)過程或保躲過程中受污染菌種在培養(yǎng)過程和保藏過程中，由于外界空氣進入，也使雜菌進入而受污染。為了防止污染，試管的棉花塞應(yīng)有一定的緊密度，不宜太松，且有必定長度，培養(yǎng)和保躲溫度不宜變化太大。每一級種子培養(yǎng)物均應(yīng)經(jīng)過嚴厲檢查，確認未受污染才干應(yīng)用，

　　(2)無菌空氣帶菌及防止

　　無菌空氣帶菌是發(fā)酵染菌的主要原因之一。杜盡無菌空氣帶菌，必需從空氣凈化流

　　程和設(shè)備的設(shè)計、過濾介質(zhì)的選用和裝填、過濾介質(zhì)的滅菌和治理等方面完美空氣凈化

　　體系。

　　(3)造就基和設(shè)備滅菌不徹底導(dǎo)致染菌及防止

　　培養(yǎng)基和設(shè)備滅菌不徹底的原因，主要與以下幾個方面有關(guān)。

　　(a)原料性狀

　　一般稀薄的培養(yǎng)基輕易滅菌徹底，而淀粉質(zhì)原料，特殊是有顆粒時，容易滅菌不徹底，造成染菌。淀粉質(zhì)原料在升溫過快或混雜不均勻時，容易結(jié)塊，使團塊中心部位“夾生”，包埋有活菌，蒸汽不易進進將其殺滅，在發(fā)酵過程中團塊散開，導(dǎo)致染菌。因此，淀粉質(zhì)培養(yǎng)基滅菌以采取實罐滅菌為好，在升溫時先攪拌混雜均勻，并加必定量α一淀粉酶使邊加熱邊液化，有大顆粒的原料應(yīng)經(jīng)過篩除往。

　　(b)實罐滅菌時未充足消除罐內(nèi)空氣

　　實罐滅菌時，罐內(nèi)空氣未完整消除，造成“假壓”，使罐頂空間局部溫度達不到滅菌請求，導(dǎo)致滅菌不徹底而污染。為此，在實罐滅菌升溫時，應(yīng)打開排氣閥門及有關(guān)聯(lián)接收的邊閥、壓力表接收邊閥等，使蒸汽通過，到達徹底滅菌。

　　(c)培養(yǎng)基持續(xù)滅菌時未到達滅菌溫度

　　培養(yǎng)基連續(xù)滅菌時,蒸汽壓力波動大，培養(yǎng)基未到達滅菌溫度，導(dǎo)致滅菌不徹底而污染。培養(yǎng)基連續(xù)滅菌應(yīng)嚴格節(jié)制滅菌溫度，Zui好采取主動把持裝置。

　　(d)設(shè)備、管道存在“死角”

　　由手操作、裝備構(gòu)造、安裝或人為造成的屏障等原因，引起蒸汽不能有效達到或不能充足達到預(yù)定應(yīng)當(dāng)達到的局部滅菌部位，從而不能達

　　到徹底滅菌的要求。這些不能徹底滅菌的部位稱為“死角”，“死角”可以是設(shè)備、管道的某一部位，也可以是培養(yǎng)基或其他物料的某一部分。

　　常見的設(shè)備、管道“逝世角”有以下幾方面：

　?、侔l(fā)酵罐的“死角”

　　②管道安裝不當(dāng)形成的“死角”

　?、侔l(fā)酵罐的“死角”

　　發(fā)酵罐內(nèi)的部件及其支持件，如拉手扶梯、攪拌軸拉桿、聯(lián)軸器、冷卻盤管、檔板、空氣散布管及其支持件、溫度計套焊接處等四周容易積集污垢，形成“死角”。加強清洗并定期革除污垢，可以排除這些“死角”。

　　發(fā)酵罐制造不當(dāng)造成“死角”。如不銹鋼襯里焊接質(zhì)量不好，導(dǎo)致不銹鋼與碳鋼之間有空氣，在滅菌時，由于三者膨脹系數(shù)不同，使不銹鋼鼓起或決裂，造成“死角”(見圖)。

　　罐底部堆積造就基中的固體物，形成硬塊，包躲著臟物(圖)，使滅菌不徹底。應(yīng)增強清洗，打消積垢。

　　罐底的增強板長期受緊縮空氣頂吹而腐化，受損或裂痕；或焊接不當(dāng)，造成滅菌不徹底(圖6-4)。應(yīng)煅成與罐底雷同弧度，使之吻合緊密，并注意焊接質(zhì)量。

　　發(fā)酵罐封頭上的人孔(或手孔)、排風(fēng)管接口、燈孔、視鏡口、進料管口．壓力表接口等都是造成“死角”的潛在之處。一般應(yīng)安裝邊閥，使滅菌徹底，并注意清洗。

　?、诠艿腊惭b不當(dāng)形成的“死角”

　　發(fā)酵車間的管道大多數(shù)以法蘭銜接，法蘭的加工、，焊接和安裝要符合滅菌要求，務(wù)使連接處兩節(jié)管道暢通、光滑、密封性好，墊片內(nèi)圓恰與法蘭內(nèi)徑相等，安裝時須對準中心。熱片內(nèi)徑太大、太小或安裝不對準中心，都會造成“死角”(圖a、b)。法蘭與管子焊接不好，受熱不均勻，易使法蘭翹曲，密封面不平，顯微鏡價格攝像頭價格，形成“死角”(見圖c)。

　　某些管道須在發(fā)酵進程中或在培養(yǎng)基滅菌后才進行滅菌，如種子罐底部的移種管，如安裝不當(dāng)，就會存在蒸汽不易通達的“逝世角”(圖 a)。打消方式見圖b。

　　壓力表安裝不公道會形成“死角”(圖6a)，打消辦法是在近壓力表處安裝放汽邊閥(圖 b)。

　　（4）設(shè)備滲漏引起染菌及防止

　　發(fā)酵設(shè)備、管道、閥門的長期使用，由于腐化、磨擦和振動等原因，往往造成滲漏。例如：設(shè)備的表面或焊縫處如有砂眼，由于腐化逐漸加深，終極導(dǎo)致穿孔；冷卻管受攪拌器作用，長期磨損，焊縫處受冷熱和振動產(chǎn)生裂痕而滲漏。

　　為了避免設(shè)備、管道、閥門滲漏，應(yīng)選用優(yōu)質(zhì)的資料，并經(jīng)常進行檢查。冷卻蛇管的渺小滲漏不易被發(fā)現(xiàn)，可以壓入堿性水；在罐內(nèi)可疑處所，用浸濕酚酞唆使劑的自布擦，如有滲漏時白布顯紅色。。

　　（5）操作問題

　　上面已指出，在菌種培養(yǎng)過程中，如操作不當(dāng)會引起染菌。在發(fā)酵過程如操作不當(dāng)也會引起染菌，如移種時或發(fā)酵過程罐內(nèi)壓力跌零，使外界空氣進入而染菌；泡沫頂蓋而造成污染；緊縮空氣壓力忽然降落，使發(fā)酵液倒流入空氣過濾器而造成污染等。

　　防止操作失誤引起染菌，要增強對技術(shù)工人的技巧培訓(xùn)和義務(wù)心教導(dǎo)，進步工人素質(zhì)，強化管理措施。

　　


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